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细胞质膜蛋白提取试剂盒(蛋白组实验、质谱适用)  Cite:0    分享

货号: S29154
复制产品信息
规格:
50T 100T
单位:
单价:¥1700.00
基本信息
产品简介
产品组成
操作步骤(仅供参考)
注意事项
基本信息
  • 产品名称
    细胞质膜蛋白提取试剂盒(蛋白组实验、质谱适用)
  • 保存温度保存温度
    按试剂盒各组分温度保存
  • 有效期
    1年
  • 适用样本
    动物细胞
产品简介

本试剂盒质膜蛋白提取试剂盒是一种快速高效的高产质膜蛋白提取试剂盒。本试剂盒提供全套试剂,适用于从各种原代或传代细胞中提取质膜蛋白。提取过程简单方便,可在1小时内完成。提取的膜蛋白不仅纯度高,保持天然活性,而且绝少交叉污染。
本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞质膜组份,本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。
本试剂盒的蛋白提取组份中不含有不可透析除去的去垢剂组份,不含SDS、Triton X 100、chaps等可能影响质谱实验的组份,基本可以满足下游任意的蛋白质组学相关实验研究。
本产品的蛋白酶抑制剂混合物中不含AEBSF,可以避免由于AEBSF导致的质谱峰漂移,因此使用本产品提取的蛋白样品可以用于质谱(Mass Spectrometry, MS)检测和分析,蛋白质组学(proteomics)等相关研究。
本试剂盒中不含有EDTA,与金属螯和层析等下游应用兼容。

产品组成
组分50T100T保存温度
质膜提取液A50ml100ml2-8℃
蛋白酶抑制剂 混合物250 μl500 μl-20℃
磷酸酶抑制剂 混合物250 μl500 μl2-8℃
洗涤液D20ml40ml2-8℃
膜蛋白提取液 E122.5 ml45ml2-8℃
膜蛋白提取液 E22.5 ml5ml2-8℃

1. 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2. 蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间 水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3. 试剂拆封后请尽快使用完!

操作步骤(仅供参考)

自备试剂和仪器
离心机、振荡器、涡旋混匀器、移液器、冰箱、冰盒,PBS 缓冲液、离心管、吸头、一次性手套
使用注意事项
1. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
2. 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
4.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
操作步骤(仅供参考)
提取液制备:
将试剂E1和试剂E2混合,配成蛋白提取液E,充分混匀备用。
每500 μl蛋白提取液E中分别加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物和2 μl磷酸酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2. 取5-10×106个细胞,在4℃,800×g条件下离心5-10分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 在细胞中加入500 -1000 μl冷的提取液A,充分混匀后,在4℃条件下静置30-60分钟,中途每隔 10分钟用移液器轻轻吹打混匀。
5. 在4℃,1000×g条件下离心5-10分钟。将上清吸入另一预冷的干净离心管,弃沉淀。
6. 上清在4℃,20000×g条件下离心30分钟。弃上清,留沉淀。
7. 在沉淀中加入400 μl冷的洗涤液D,充分混匀。
8.在4℃,20000×g条件下离心30分钟。弃上清,留沉淀。
9. 在沉淀中加入200 μl提取液E,充分混匀。
10. 在4℃条件下振荡30-40分钟。
11. 在4℃,10000×g条件下离心10分钟。
12. 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到细胞质膜蛋白。
13. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或用于下游实验。
14. 将蛋白样品透析处理或者脱盐柱脱盐处理后用于下游实验。
常见问题分析

1. 蛋白浓度低?
处理部分样本时可能没有裂解完全,导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即 可。最好在持续振荡的条件下处理,没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2. 用什么方法定量蛋白?
建议用BCA法,或者Bradford法。

注意事项

1. 正式实验前请选取几个样本做预实验,以优化实验条件,取得最佳实验效果。
2. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖和管内壁上的液体离心至管底,避免开盖时试剂损失。
3. 禁止与其他品牌的试剂混用,否则会影响使用效果。
4. 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
5. 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿,可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。6. 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

6. 我司生产的生化试剂如无特殊标注,基本为非无菌包装,若用于细胞实验,请提前做好预处理。需低温保存的产品,一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效。
7. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

8. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

9. 实验结果可由多种因素影响,相关处理只限于产品本身,不涉及其他赔偿。

 

备注:由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。

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