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- ELISA检测
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抗体蛋白
二抗生物素标记 过氧化物酶(HRP)标记 胶体金试剂 FITC荧光标记 RBITC荧光标记 二抗免疫血清 其它荧光标记二抗 藻红蛋白(PE)荧光标记 胶体金(Gold)标记 SAlexa Fluor荧光系列 碱性磷酸酶(AP)标记 别藻蓝蛋白(APC)荧光标记 其它标记 PE标记二抗 DyLight标记二抗 AU标记二抗 Biotin标记二抗 AMCA标记二抗 Texas Red标记二抗 TRITC标记二抗 HRP标记二抗 未标记二抗 Cy标记二抗 AbBox Fluor标记二抗内参抗体 小分子抗体抗体标记试剂盒细菌抗体蛋白病毒包装试剂杂交瘤融合筛选WB、IHC、ELISA相关试剂细胞培养试剂病原微生物抗原抗体假病毒抗体校准品其他抗原抗体标记的标签抗体病理级IHC抗体重组蛋白
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斑马鱼产品
订货时间：周一至周五
订货Q Q：79688691
订货邮件：79688691@qq.com
基本信息-
基质硅基磁珠
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配体重组 Protein G 蛋白
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粒径200nm
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磁珠浓度10mg/mL
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结合能力≥0.85mg hIgG/mL 磁珠
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适用范围IP，Co-IP，ChIP，RIP 等
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保存温度2-8℃(勿高速离心、干燥或冷冻磁珠)
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有效期2年
产品简介Protein G 磁珠是粒径为 200nm 的纳米磁珠表面上共价结合了大量的 Protein G 蛋白，纳米级磁珠提供的超大比表面积，具有更多的结合位点，磁珠使用量更少，非特异性吸附率低。重组 Protein G 蛋白更适合于结合mouse IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, rat IgG1, IgG2a,IgG2b, IgG2c, rabbit and goat polyclonal Abs, 以及human IgG1, IgG2, IgG3 和 IgG4。本产品广泛应用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等样品中抗原的免疫沉淀（IP）或免疫共沉淀（Co-IP）。由于采用磁性分离，使得每次 IP 和 Co-IP 可以节省 40%的时间。
操作步骤（仅供参考）注意：缓冲液自行准备或直接购买我司 IP 试剂盒
贴壁细胞样品
1. 移去培养基，用 PBS 洗细胞两次。
2. 收集细胞至 1.5mL EP 管内，按比例加入 IP Lysis/WashBuffer，同时加入 PMSF 等相应的抑制剂，混匀后置于冰上静置 5∽20min（期间混匀几次）。
3. 4℃, 12000∽16000xg,10min 离心收集上清液，置于冰上以备后续实验（或置于-80℃长期保存）。
培养皿 IP Lysis/Wash Buffer 推荐使用体积：
| 培养皿大小/表面积 | IP Lysis/Wash Buffer 体积 |
| 100 mm x 100 mm | 500∽1000µL |
| 100 mm x 60 mm | 100∽300µL |
| 6 孔板 | 100∽200µL |
悬浮细胞样品
1. 4℃、500∽1000xg、10min，收集细胞，弃上清。
2. 用 PBS 洗细胞一次，即用 PBS 将细胞团重悬，4℃、500∽1000xg、5min，收集细胞，弃上清。
3. 用预冷的 IP Lysis/Wash Buffer 重悬细胞。每 50mg细胞使用 500μL IP Lysis/Wash Buffer。同时加入 PMSF等相应的抑制剂，混匀后置于冰上静置 5∽20min（期间混匀几次）。
4. 4℃,12000∽16000xg,10min 离心收集上清液，置于冰上以备后续实验（或置于-80℃长期保存）。
血清样品
一般建议建议用 IP Lysis/Wash Buffer 稀释血清样品至目标蛋白终浓度为 50~150µg/mL，置于冰上备用（或置于-20℃长期保存）。
免疫复合物的制备
注意：样品所需的量和孵育时间均依赖于每个特定的抗体抗原体系，因而可能需要优化才能得到最大产量。
以下实验方案针对 2∽10μg 亲和纯化的抗体，根据需要可以按比例放大。
1. 在离心管中，将每个样品的细胞裂解液与 2∽10μg 免疫沉淀抗体结合。每个免疫沉淀反应推荐的总蛋白量为 500∽1500μg。
2. 用IP Lysis/Wash Buffer将抗体以及制备好的样品稀释至 300∽500μL。
3. 在室温下孵育 1∽2h，或 4℃ 2∽4h，以形成免疫复合物。
免疫沉淀
注意：为保证磁珠均匀分布，使用前通过反复颠倒或轻微涡旋混匀瓶中磁珠
1. 将 20∽50µL 的Protein G 磁珠加入1.5mL 离心管中。
2. 向磁珠中加入 500µL 预冷 PBS，轻柔混匀。
3. 将离心管放入磁力架中收集磁珠到离心管的一边。去除上清。
4. 向离心管中加入 200∽500µL IP Lysis/Wash Buffer。颠倒离心管数次或轻微涡旋混匀 1min。用磁力架收集磁珠。去除上清。
5. 将抗原样品/抗体混合物加入装有磁珠的离心管中，保持混匀室温下孵育 1∽2h，或 4℃ 2∽4h。
6. 用磁力架收集磁珠，除去未结合的样品，保存以备分析。
7. 向离心管中加入 1000µL IP Lysis/Wash Buffer，轻柔混匀磁珠 5∽10min。收集磁珠，弃上清。再重复洗两次。
8. 变性洗脱：向离心管中加入 80∽100µL SDS-PAGESample Loading Buffer（1×），将样品置于 100℃水浴或者金属浴中加热 10min。通过磁力架分离磁珠，保留含有目的抗原的上清。
备注:如需保持蛋白活性，也可采用以下洗脱方式。
低 pH 洗脱：向离心管中加入 100µL Elution Buffer。保持混匀在室温下孵育离心管 5∽10min。通过磁力分离磁珠，保留含有目的抗原的上清。每 100µL 洗出液中加入20µL Neutralization Buffer 来中和低 pH。
注意事项1. 进行实验操作之前，请务必认真阅读本操作说明书。
2. 请勿高速离心、干燥或冷冻磁珠，这些操作会导致磁珠聚集而降低结合能力。
3. IP 实验中不同类型的抗体与抗原结合的亲和性是有区别的，抗体与抗原结合还会受到 IP Lysis/Wash Buffer 的影响，因此可自行优化操作细节或者筛选及配制缓冲液进行实验。
4. 磁珠使用前应充分振荡均匀。磁珠应保存在储存溶液中，防止干燥。
5.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
6.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
7.实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
备注：由于产品信息可能会有优化升级，请以实际收货标签信息为准。
问题解决1. 抗原没有免疫沉淀下来
① 样品中所含的抗原过少，不足以被检测
建议：通过 SDS-PAGE 或蛋白免疫印迹验证裂解液中蛋白的表达和/或裂解效率； 如果需要，加大样品量
② 抗体无法结合抗原
建议：选择另一种特异性抗体，或者选择另一种识别不同抗原表位的抗体。
③ IP Lysis/Wash Buffer 中的成分干扰了抗原与抗体的结合
建议：使用其它缓冲液进行免疫沉淀和漂洗（例如，含有 0.5% CHAPS 的 TBS）
2. 获得的蛋白量低
① 蛋白质被降解
建议：加入蛋白酶抑制剂
② 所使用的磁珠量不够
建议：提高捕获免疫复合物所使用的磁珠量
③ 样品中的目标蛋白量不够
建议：提高抗原样品量
3. 多条非特异条带
有非特异性的蛋白结合在磁珠上
建议：在 IP Lysis/Wash Buffer 中加入 50∽350mMNaCl。加大洗脱力度和次数。
4. 磁珠聚集
磁珠在低 pH 的 Elution Buffer 中发生聚集属于正常现象，不影响磁珠的正常使用。
建议：用 IP Lysis/Wash Buffer 至中性，然后用含有0.1%（v/v）Tween-20 的 Tris buffer（pH7.5）振荡重悬磁珠，并用超声波水浴处理，即可使磁珠恢复均匀状态，以上处理均不影响磁珠的抗体结合效率。也可添加终浓度为 0.1%（v/v）的非离子型去垢剂（如Tween-20 或 Triton X-100）可有效防止磁珠聚集。
注意：超声处理也会使磁珠在样品溶液中捕获的抗体脱落，所以磁珠在加样后洗脱前不宜使用该方法。
