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抗体蛋白
二抗生物素标记 过氧化物酶(HRP)标记 胶体金试剂 FITC荧光标记 RBITC荧光标记 二抗免疫血清 其它荧光标记二抗 藻红蛋白(PE)荧光标记 胶体金(Gold)标记 SAlexa Fluor荧光系列 碱性磷酸酶(AP)标记 别藻蓝蛋白(APC)荧光标记 其它标记 PE标记二抗 DyLight标记二抗 AU标记二抗 Biotin标记二抗 AMCA标记二抗 Texas Red标记二抗 TRITC标记二抗 HRP标记二抗 未标记二抗 Cy标记二抗 AbBox Fluor标记二抗内参抗体 小分子抗体抗体标记试剂盒细菌抗体蛋白病毒包装试剂杂交瘤融合筛选WB、IHC、ELISA相关试剂细胞培养试剂病原微生物抗原抗体假病毒抗体校准品其他抗原抗体标记的标签抗体病理级IHC抗体重组蛋白
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斑马鱼产品
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产品简介Protein A 琼脂糖凝胶是以自制的琼脂糖凝胶为介质，以重组 Protein A 蛋白为配体，具有很高的物理化学稳定性，配基不易脱落，寿命长，使用方便。重组 Protein A 蛋白更适合于结合 mouse IgG2a, IgG2b, IgA, rabbit IgG, 以及 human IgG1, IgG2 和 IgG4。
本产品广泛应用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等样品中抗原的免疫沉淀（IP）或免疫共沉淀（Co-IP），也可以用于抗体的纯化。
基本信息-
基质4%高度交联的琼脂糖凝胶
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配体重组 Protein A 蛋白
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粒径30∽100μm
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浓度凝胶体积占悬浮液体积的 25%
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结合能力≥20mg hIgG/mL 凝胶
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适用范围IP，Co-IP，ChIP，RIP，抗体纯化等
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保存温度2-8℃
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有效期2年
操作步骤（仅供参考）注意：缓冲液自行准备或直接购买我司 IP 试剂盒。
贴壁细胞样品
1. 移去培养基，用 PBS 洗细胞两次。
2. 收集细胞至 1.5mL EP 管内，按比例加入 IP Lysis/WashBuffer，同时加入 PMSF 等相应的抑制剂，混匀后置于冰上静置 5∽20min（期间混匀几次）。
3. 4℃, 12000∽16000xg,10min 离心收集上清液，置于冰上以备后续实验（或置于-80℃长期保存）。
培养皿 IP Lysis/Wash Buffer 推荐使用体积：
| 培养皿大小/表面积 | IP Lysis/Wash Buffer 体积 |
| 100 mm x 100 mm | 500∽1000µL |
| 100 mm x 60 mm | 100∽300µL |
| 6 孔板 | 100∽200µL |
悬浮细胞样品
1. 4℃、500∽1000xg、10min，收集细胞，弃上清。
2. 用 PBS 洗细胞一次，即用 PBS 将细胞团重悬，4℃、500∽1000xg、5min，收集细胞，弃上清。
3. 用预冷的 IP Lysis/Wash Buffer 重悬细胞。每 50mg细胞使用 500μL IP Lysis/Wash Buffer。同时加入 PMSF等相应的抑制剂，混匀后置于冰上静置 5∽20min（期间混匀几次）。
4. 4℃,12000∽16000xg,10min 离心收集上清液，置于冰上以备后续实验（或置于-80℃长期保存）。
血清样品
一般建议建议用 IP Lysis/Wash Buffer 稀释血清样品至目标蛋白终浓度为 50~150µg/mL，置于冰上备用（或置于-20℃长期保存）。
免疫复合物的制备
注意：样品所需的量和孵育时间均依赖于每个特定的抗体抗原体系，因而可能需要优化才能得到最大产量。以下实验方案针对 2∽10μg 亲和纯化的抗体，根据需要可以按比例放大。
1. 在离心管中，将每个样品的细胞裂解液与 2∽10μg 免疫沉淀抗体结合。每个免疫沉淀反应推荐的总蛋白量为 500∽1500μg。
2. 用IP Lysis/Wash Buffer将抗体以及制备好的样品稀释至 300∽500μL。
3. 在室温下孵育 1∽2h，或 4℃ 2∽4h，以形成免疫复合物。
免疫沉淀
注意：为保证凝胶均匀分布，使用前通过反复颠倒或轻微涡旋混匀瓶中凝胶。
1. 将 20∽50µL 的Protein A 琼脂糖凝胶加入 1.5mL 离心管中。
2. 向凝胶中加入 500µL 预冷 PBS，轻柔混匀。
3. 将离心管放入离心机中 1000rpm、5min 收集凝胶到离心管的底部，去除上清。
4. 向离心管中加入 200∽500µL IP Lysis/Wash Buffer。颠倒离心管数次或轻微涡旋混匀 1min。将离心管放入离心机中 1000rpm，5min 收集凝胶到离心管的底部，去除上清。
5. 将制备好抗原样品/抗体混合物样品加入装有凝胶的离心管中，保持混匀室温下孵育 1∽2h，或 4℃ 2∽4h。6. 离心 1000rpm，5min 收集凝胶，除去未结合的样品，保存以备分析。
7. 向离心管中加入 1000µL IP Lysis/Wash Buffer，轻柔混匀 5∽10min。收集凝胶，弃上清。再重复洗两次。
8. 变性洗脱：向离心管中加入 80∽100µL SDS-PAGE Sample Loading Buffer（1×），将样品置于 100℃水浴或者金属浴中加热 10min。通过离心分离凝胶，保留含有目的抗原的上清。
备注:如需保持蛋白活性，也可采用以下洗脱方式。
低 pH 洗脱：向离心管中加入 100µL Elution Buffer。保持混匀在室温下孵育离心管 5∽10min。通过离心分离凝胶，保留含有目的抗原的上清。每 100µL 洗出液中加入20µL Neutralization Buffer 来中和低 pH。
注意事项1. 进行实验操作之前，请务必认真阅读本操作说明书。
2. IP 实验中不同类型的抗体与抗原结合的亲和性是有区别的，抗体与抗原结合还会受到 IP Lysis/Wash Buffer 的影响，因此可自行优化操作细节或者筛选及配制缓冲液进行实验。
3. 琼脂糖凝胶使用前应充分振荡均匀。凝胶应保存在储存溶液中，防止干燥
4.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
5.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
6.实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
备注：由于产品信息可能会有优化升级，请以实际收货标签信息为准。
问题解决1. 抗原没有免疫沉淀下来
① 样品中所含的抗原过少，不足以被检测
建议：通过 SDS-PAGE 或蛋白免疫印迹验证裂解液中蛋白的表达和/或裂解效率； 如果需要，加大样品量
② 抗体无法结合抗原
建议：选择另一种特异性抗体，或者选择另一种识别不同抗原表位的抗体。
③ IP Lysis/Wash Buffer 中的成分干扰了抗原与抗体的结合
建议：使用其它缓冲液进行免疫沉淀和漂洗（例如，含有 0.5% CHAPS 的 TBS）
2. 获得的蛋白量低
① 蛋白质被降解
建议：加入蛋白酶抑制剂
② 所使用的凝胶量不够
建议：提高捕获免疫复合物所使用的凝胶量
③ 样品中的目标蛋白量不够
建议：提高抗原样品量
3. 多条非特异条带有非特异性的蛋白结合在凝胶上
建议：在 IP Lysis/Wash Buffer 中加入 50∽350mMNaCl。加大洗脱力度和次数。
4. 凝胶易粘附管壁
建议：使用低吸附率的耗材进行凝胶操作。
