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斑马鱼产品
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基本信息-
产品名称ATP含量测定试剂盒
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检测方法比色法
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保存温度按试剂盒各组分温度保存
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有效期6个月(未开封)；1个月(开封后)
产品简介正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
检测意义：三磷酸腺苷（adenosine 5'-triphosphate，ATP）是生物体内能量转换最基本的载体, 其含量的变化直接关系到各器官的能量代谢。ATP 作为最重要的能量分子在细胞的各种生理、病理过程中起着重要作用。ATP 水平的改变，会影响许多细胞的功能。通常细胞在凋亡、坏死或处于一些毒性状态下，ATP 水平会下降，而高葡萄糖刺激等对于一些细胞可以上调细胞内 ATP 水平。通常ATP 水平的下降表明线粒体的功能受损或下降，在细胞凋亡时 ATP 水平的下降通常和线粒体的膜电位下降同时发生状态。ATP 含量测定试剂盒可以用于检测红细胞或组织内的 ATP 水平。
测定原理：肌酸激酶催化三磷酸腺苷和肌酸，生成磷酸肌酸，用磷钼酸比色法检测生成的磷的量,从而计算出 ATP 含量。
产品组成| 组分 | 规格 | 保存温度 | |
| 试剂一 | 底物液Ⅰ | 粉剂×1瓶 | 室温 |
底物液Ⅰ配制：用时加10ml煮沸双蒸水溶解，并沸水浴使溶解完全；临用前观察如有结晶， | |||
| 试剂二 | 底物液Ⅱ | 20ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 试剂三 | 促进剂 | 粉剂×2支 | -20℃ |
| 液体760μL×2瓶 | 2-8℃ | ||
| 临用前一支试剂三粉剂加入到一支试剂三液体中溶解后使用。 | |||
| 试剂四 | 沉淀剂 | 液体5.5ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 试剂五 | 显色剂 | 甲液7 ml×4瓶 | 2-8℃ |
| 乙液6 ml×4瓶 | 2-8℃ | ||
显色应用液的配制：用时取一瓶显色剂甲液加入一瓶显色剂乙液中，充分混匀4℃待用，现用现配 | |||
| 试剂六 | 终止剂 | 50ml×1瓶 | 室温 |
| 试剂七 | ATP标准品 | 粉剂×2支 | 2-8℃ |
| 5mmol/L ATP 标准品贮备液配制：用时加双蒸水定容至1ml，制备 5mmol/L ATP 标准品贮备液。 | |||
| 1mmol/L ATP标准品应用液配制：将标准品贮备液与双蒸水1：4稀释，即5倍稀释。 | |||
| 试剂八 | 双蒸水 | 40ml×1瓶 | 4℃或室温 |
操作步骤（仅供参考）所需仪器耗材及试剂
含636nm波长的分光光度计及0.5cm光径比色皿（或酶标仪及 96 孔板）、37℃水浴锅或恒温箱、沸水浴锅、台式低速离心机、各种规格移液器、双蒸水、生理盐水（0.9%）、涡旋混匀器、试管或离心管、蛋白测定试剂（本公司有售）。
样本前处理
1. 红细胞：抗凝全血取下层压积红细胞，一般按 1：4 的体积比加双蒸水进行稀释，再混匀使溶血完全，制备成溶血液。将制好的溶血液加入玻璃试管中沸水加热煮 10分钟，取出混匀抽提 1 分钟，4000 转/分钟离心 10 分钟，取上清液待测。
2. 组织样本：准确称取组织重，按重量（g）：体积（ml）=1：9 的比例，加入 9 倍体积的冷双蒸水，冰水浴匀浆,制成 10%的匀浆液(取出部分 3500 转/分离心 10 分钟,取上清测定蛋白浓度)，再置于沸水浴中煮 10 分钟，取出混匀抽提 1 分钟，3500 转/分离心 10 分钟，取上清液待测。
3、培养细胞：先离心处理将细胞与培养上清分离，除去培
养上清，得到下层沉淀细胞（一般细胞数量达到 106），将
收集好的细胞加入 300～500μL 冷双蒸水，置于冰水浴中
匀浆破碎(取出部分测定蛋白浓度)，后将细胞悬液于沸水
浴中加热 10 分钟，取出混匀抽提 1 分钟，即可用于测定。
[注]：混匀抽提 1 分钟即为漩涡混匀 1 分钟。
操作步骤
| 空白管 | 标准管 | 测定管 | 对照管 | |
| 1mmol/L 标准液（μL） | 30 | 30 | ||
| 样本（μL） | 30 | 30 | ||
| 试剂一：底物液Ⅰ（μL） | 100 | 100 | 100 | 100 |
| 试剂二：底物液Ⅱ（μL） | 200 | 200 | 200 | 200 |
| 试剂三：促进剂（μL） | 30 | 30 | ||
| 双蒸水（μL） | 30 | 30 | ||
| 混匀，37℃水浴 30 分钟 | ||||
| 试剂四：沉淀剂（μL） | 50 | 50 | 50 | 50 |
| 充分混匀后，4000rpm 离心 5 分钟，取上清液 300μL 进行测定 | ||||
| 上清液（μL） | 300 | 300 | 300 | 300 |
| 试剂五：显色液（μL） | 500 | 500 | 500 | 500 |
| 混匀，室温静置 2 分钟 | ||||
| 试剂六：终止剂（μL） | 500 | 500 | 500 | 500 |
| 混匀，37℃静置 5-10 分钟， 636nm, 光径 0.5cm，双蒸水调零，分光光度计测各管吸光度值 | ||||
[注]：在比色前比色皿用自来水洗 10 余次，再用双蒸水洗 4～5 次，以免磷污染。
简便操作表：（如果样本量大，建议将试剂混合后再按照该表进行操作,可以节省操作时间）
1、混合试剂配制：
工作液 A:按试剂一:试剂二:试剂三=100:200:30 的比例配制，现用现配，用多少配多少。
工作液 B:按试剂一:试剂二=100:200 的比例配制，现用现配，用多少配多少。
2、混合试剂配制完全后按下表操作：
| 空白管 | 标准管 | 测定管 | 对照管 | |
| 1mmol/L 标准液（μL） | 30 | 30 | ||
| 样本（μL） | 30 | 30 | ||
| 工作液 A（μL） | 330 | 330 | ||
| 工作液 B（μL） | 300 | 300 | ||
| 双蒸水（μL） | 30 | 30 | ||
| 混匀，37℃水浴 30 分钟 | ||||
| 试剂四：沉淀剂（μL） | 50 | 50 | 50 | 50 |
| 充分混匀后，4000rpm 离心 5 分钟，取上清液 300μL 进行测定 | ||||
| 样本上清液（μL） | 300 | 300 | 300 | 300 |
| 试剂五：显色液（μL） | 500 | 500 | 500 | 500 |
| 混匀，室温静置 2 分钟 | ||||
| 试剂六：终止剂（μL） | 500 | 500 | 500 | 500 |
| 混匀，37℃静置 5-10 分钟， 636nm, 光径 0.5cm，双蒸水调零， 测各管吸光度值。 | ||||
[注]：在比色前比色皿用自来水洗 10 余次，再用双蒸水洗 4～5 次，以免磷污染。
计算公式
1. 红细胞中 ATP 含量计算公式：
2. 组织（或细胞）中 ATP 含量计算公式（其一）
3. 组织中 ATP 含量计算公式（其二）：
C标准：标准品浓度,1000μmol/L
N：样本测定前稀释倍数
CHb：血红蛋白浓度,gHb/L
Cpr：匀浆液蛋白浓度,gprot/L（prot 指蛋白）
W：组织重量，g
V 样总：匀浆液总体积，L。
注意事项1. 此法具有微量、灵敏、快速的特点。对测定所用试管要求严格，要求不能有任何磷污染，建议最好用一次性塑料试管（本所有售），避免磷污染是检测成败的关键。
2. 显色应用液配好后，不可放置太久，一般可保存五天，最好当天用当天配（提前半小时配好）。
3. 组织匀浆宜用 2%～5%浓度的匀浆上清(建议做预试来决定上样浓度)，若样本磷浓度过高，则底色过深（对照管 OD 过高），需注意加样的准确性(样本本身的磷带来的干扰较大,操作不当容易使结果不准或产生负值)；一般通过做预试验将对照 OD 值控制在 1.0以下。
4. 我司生产的生化试剂如无特殊标注，基本为非无菌包装，若用于细胞实验，请提前做好预处理。需低温保存的产品，一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
5. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
6. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
7. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
备注：由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。
