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斑马鱼产品
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基本信息-
产品名称活细菌/死细菌双染试剂盒(DMAO/PI)
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保存温度按试剂盒各组分温度保存
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有效期1年
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产品应用荧光酶标仪，荧光光度计，激光共聚焦，流式细胞仪
产品简介本品活细菌/死细菌染色试剂盒(DMAO/PI)是采用DMAO/PI绿色-红色荧光探针双染细菌的方法染色活细菌和死细菌。
细菌细胞活性取决于其代谢特征或膜完整性。但是依赖于代谢特征的检测方法通常只适用于部分细胞类型。评估细胞膜完整性的方法具有更高的灵敏度和更普遍的适用性。
本品活细菌/死细菌染色试剂盒利用细菌细胞膜的完整性差异，可以可靠地进行染色并在几分钟内定量区分活细菌和死细菌。
本试剂盒中的DMAO绿色荧光的细菌核酸探针，能透过活细菌的完整结构的质膜，既能染色活细菌，也能染色死细菌。DMAO对革兰氏阳性和阴性细菌均适用，具有
500 / 526 nm的最大激发/发射波长。
产品组成| 组分 | 500T | 1000T | 保存温度 |
| 试剂A: DMAO 染色液 | 100 μl | 2 x 100 μl | -20℃ 避光 |
| 试剂B: PI 染色液 | 400 μl | 2 x 400 μl | 2-8℃ 避光 |
1. 染料长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
2. 染色液A为DMSO溶液，冬季气温较
低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4. 试剂拆封后请尽快使用完！
操作步骤（仅供参考）1. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2. 染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。融解后离心至管底部
再打开螺旋盖。
3. 试剂A为了便于观察防止误操作导致损失，在试剂盒中时是采用透明管包装，收到后可以离心移入干燥黑色避光密封管或者用铝箔包裹避光。
4. 建议收到产品后，根据单次使用量，对DMAO母液进行小量分装，每次使用一管，试剂-20℃避光冻存，一年稳定。
5. 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
6. 所有染色操作在塑料容器进行，不要在玻璃容器染色。
7. 以下为进行活死细菌染色观察的参考步骤，可以根据文献的方法进行调整。如果有必要，也可以设定对照活细菌和死细菌，进行定量检测。可以参考附录中的对照细胞设定方法，也可以根据需要自己设定
对照和检测方法。
8. 标记的条件因细菌种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细菌类型、细菌的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。
9. 流式检测时建议添加直径6.0 µm微球标准品。
10. 细菌类型会明显影响红色荧光的量。
自备材料
荧光酶标仪/荧光光度计/激光共聚焦/流式细胞仪/荧光显微镜等，离心机，移液器，冰箱，冰盒，0.85% NaCl溶液，离心管，吸头， 一次性手套，黑色透明底96孔细胞培养板
染色工作液的配制
根据样品数按下列比例配制染色工作液。
用37℃培养箱预热0.85% NaCl溶液将DMAO荧光染料进行500倍稀释，将PI进行100-500倍
稀释，配制成染色工作液。
例如：
每10 ml 0.85% NaCl 溶液中加入20 μl染色液A，充分混匀，即成染色工作液A。
每10 ml 0.85% NaCl 溶液中加入20-100 μl染色液B，充分混匀，即成染色工作液B。
细菌染色
1. 收集样本细菌，用0.85% NaCl溶液洗涤细胞3次。
2. 用100 μl-200 μl 染色工作液将细菌重悬。
3. 在室温避光孵育15分钟。
4. 用0.85% NaCl溶液洗涤细菌一次。
5. 用适量0.85% NaCl溶液重悬细菌。
6. 将5 μl菌液滴加到载玻片，盖上盖玻片，油镜观察。
7. 用荧光显微镜观察。激发波长为488 nm，最大发射波长为520 nm和635 nm。
结果分析
可以在Ex / Em = 488 / 520 nm（FITC滤光器组）和540 / 635 nm（TRITC滤光器组）下荧光测量染色细胞，
分别用于活细菌和死细菌。
荧光显微镜下，使用490±10 nm波长激发，活细菌为黄绿色，死细菌为红色。
用545 nm波长激发，仅能够看到红色的死细菌。
注意事项1. 正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。
2. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，
避免开盖时试剂损失。
3. 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果
4. 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗
并彻底清除残留清洁剂。
5. 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。
6. 我司生产的生化试剂如无特殊标注，基本为非无菌包装，若用于细胞实验，请提前做好预处理。需低温保存的产品，一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
7. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
8. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
9. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
备注：由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。
