

链霉亲和素磁珠,也称 Streptavidin 磁珠或 SA 磁珠,是粒径为 200nm 的纳米磁珠表面上共价结合了大量的高质量的链霉亲和素(Streptavidin)。纳米级磁珠提供的超大比表面积,具有更多的结合位点,磁珠使用量更少,非特异性吸附率低,可以快速、高效、灵敏、特异性地与生物素(Biotin)标记的抗体、核酸、蛋白、多肽、凝集素等分子结合。主要用于分离纯化生物素标记的核酸、抗体、蛋白或相关复合物等,用于免疫沉淀(IP)、细胞分选、DNA-蛋白相互作用研究等。

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基质硅基磁珠
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配体重组 Streptavidin 蛋白
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粒径200nm
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磁珠浓度10mg/mL
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结合能力≥0.5mg 生物素化 IgG/mL 磁珠
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适用范围①分离纯化:结合生物素化核酸等;②分子相互作用:IP,Co-IP,RNA Pulldown等。
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保存温度2-8℃ 勿冷冻
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有效期2年

(一)结合生物素化分子操作流程
1. 使用前准备
1.1 缓冲液:以下是常用的缓冲液成分,用户可根据需要调整盐浓度和 pH
缓冲液 | 配方 |
Buffer 1(适用于结合生物素化核酸) | 10mM Tris-HCl(pH 7.5),1mMEDTA,1M NaCl,0.01∽0.2% Tween-20 |
Buffer 2(适用于结合生物素化抗体/蛋白) | PBS(pH7.4),0.05% Tween 20,可根据需要添加 0.01∽0.1%BSA |
1.2 磁力架、漩涡振荡器、旋转混合仪、移液器、枪头及离心管
2. 结合生物素化核酸
2.1 将磁珠置于漩涡振荡器上 20s,振荡重悬磁珠。用移液器移取 100μL 磁珠到新的离心管中。将离心管置于磁力架上,静置 1min(此操作后续简称为磁性分离),用移液器吸去上清液,从磁力架上取下离心管。
2.2 加入 1mL Buffer 1 到离心管中,盖上离心管盖,充分振荡重悬磁珠。磁性分离,移去上清液。
2.3 重复“步骤 2.2”一次。
2.4 加入 500μL 的用 Buffer 1 稀释的生物素化核酸,充分振荡重悬磁珠。将离心管置于旋转混合仪上,室温旋转混合 30min。
2.5 磁性分离,将上清液转移至新的离心管。按“步骤 2.2”的方法洗涤磁珠 3 次。
2.6 根据后续实验的要求,加入合适的低盐缓冲液,重悬磁珠。至此结合生物素化核酸步骤完成。磁珠可用于后续操作。
2.7 用户可以通过测定反应前后核酸的浓度,计算结合到磁珠上的核酸量(反应前浓度-反应后浓度)×反应溶液体积。
3. 结合生物素化抗体/蛋白
3.1 将磁珠置于漩涡振荡器上 20s,振荡重悬磁珠。用移液器移取 100μL 磁珠到新的离心管中。将离心管置于磁力架上,静置 1min(此操作后续简称为磁性分离),用移液器吸去上清液,从磁力架上取下离心管。
3.2 加入 1mL Buffer 2 到离心管中,盖上离心管盖,充分振荡重悬磁珠。磁性分离,移去上清液。
3.3 重复“步骤 3.2”两次,共洗涤 3 次。3.4 加入 1mL 的用 Buffer 2 稀释的生物素化抗体/蛋白,充分振荡重悬磁珠。将离心管置于旋转混合仪上,室温旋转混合 60min。
3.5 磁性分离,将上清液转移至新的离心管。按“步骤 3.2”的方法洗涤磁珠 5 次。
3.6 根据后续实验的要求,加入合适的缓冲液,重悬磁珠。至此结合生物素化抗体/蛋白步骤完成。磁珠可用于后续操作。
(二)生物素化抗体免疫沉淀操作流程
注意:缓冲液自行准备或直接购买我司 IP 试剂盒。
免疫复合物的制备
注意:样品所需的量和孵育时间均依赖于每个特定的抗体抗原体系,因而可能需要优化才能得到最大产量。
以下实验方案针对 2∽10μg 生物素化抗体,根据需要可以按比例放大。
1. 在离心管中,将每个样品的细胞裂解液与 2∽10μg 生物素化抗体结合。每个免疫沉淀反应推荐的总蛋白量为 500∽1500μg。
2. 用IP Lysis/Wash Buffer将抗体以及制备好的样品稀释至 300∽500μL。
3. 在室温下孵育 1∽2h,或 4℃ 2∽4h,以形成免疫复合物。
免疫沉淀
注意:为保证磁珠均匀分布,使用前通过反复颠倒或轻微涡旋混匀瓶中磁珠。
1. 将 20∽50µL 的 Biolinkedin® 链霉亲和素磁珠加入1.5mL 离心管中。
2. 向磁珠中加入 500µL 预冷 PBS,轻柔混匀。3. 将离心管放入磁力架中收集磁珠到离心管的一边。去除上清。
4. 向离心管中加入 200∽500µL IP Lysis/Wash Buffer。颠倒离心管数次或轻微涡旋混匀 1min。用磁力架收集磁珠。去除上清。
5. 将抗原样品/抗体混合物加入装有磁珠的离心管中,保持混匀室温下孵育 1∽2h,或 4℃ 2∽4h。
6. 用磁力架收集磁珠,除去未结合的样品,保存以备分析。
7. 向离心管中加入 1000µL IP Lysis/Wash Buffer,轻柔混匀磁珠 5∽10min。收集磁珠,弃上清。再重复洗两次。
8. 变性洗脱:向离心管中加入 80∽100µL SDS-PAGESample Loading Buffer(1×),将样品置于 100℃水浴或者金属浴中加热 10min。通过磁力架分离磁珠,保留含有目的抗原的上清。备注:如需保持蛋白活性,也可采用以下洗脱方式。

2. 请勿高速离心、干燥或冷冻磁珠,这些操作会导致磁珠聚集而降低结合能力。
3. 实验中 SA 与生物素化分子结合的能力是有区别的,结合还会受到 Buffer 的影响,因此可自行优化操作细节或者筛选及配制缓冲液进行实验。
4. 如需生物素分子与 SA 磁珠分离,可采用:① 0.1% SDS,煮沸 5min;② pH=8.2,含 95%甲酰胺的 10mM EDTA 中,65℃5min 或 90℃2min。脱落率95%。
5. 磁珠使用前应充分振荡均匀。磁珠应保存在储存溶液中,防止干燥。
6.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
7.为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
8.实验结果可由多种因素影响,相关处理只限于产品本身,不涉及其他赔偿。
备注:由于产品信息可能会有优化升级,请以实际收货标签信息为准。