1.Lipo6000™转染试剂(Lipo6000™ Transfection Reagent)是一种非常高效的新型转染试剂，达到了国际最主流转染试剂的转染效果。适用于把质粒、siRNA或其它形式的核酸包括DNA、RNA、寡核苷酸、以及核酸蛋白复合物或带负电荷的蛋白转染到真核细胞中，也可以用于活体动物的核酸转染以用于基因治疗。

2.Lipo6000™转染试剂对于常见的哺乳动物细胞具有非常高的转染效率、重复性好、操作简单、无明显的细胞毒性，并且对于贴壁细胞和悬浮细胞都适用。

3.Lipo6000™转染试剂的使用方法和常用的Lipofectamine®2000 Reagent基本一致。并且经过对HEK293T、Hela、NIH3T3、HEK293FT、CHO等细胞的测试，转染效率也和Lipofectamine® 2000 Reagent相当甚至略高。

4.Lipo6000™转染试剂不仅适用于质粒、siRNA等单一成分的细胞转染，也适合多个质粒或者质粒与siRNA等的组合转染。

5.Lipo6000™转染试剂转染过表达质粒后，通常24-48小时后达到较高的蛋白表达水平，并且很多情况下蛋白表达量在转染后48小时显著高于转染后24小时；转染siRNA通常3-5天后对于目的基因的下调水平会比较理想。

6.Lipo6000™转染试剂转染细胞时，基本不受细胞培养液中的血清和抗生素的影响，即可以在血清和抗生素存在的情况下进行细胞转染。但为了取得最佳的转染效果，推荐转染时使用不含抗生素的含血清的细胞培养液。

7.Lipo6000™转染试剂的转染效果可以通过转染表达EGFP等荧光蛋白的质粒进行快速鉴定。

一、 DNA转染
1. 细胞培养(以六孔板为例，其它培养板或培养皿可参考六孔板)：在转染前一天(18-24小时)按照每孔约20-70万细胞(具体的细胞数量据细胞类型、大小和细胞生长速度等而定)接种到六孔板内进行培养，使第二天细胞密度能达到约70-90%。
2. 在进行下述转染步骤前，把培养有细胞的六孔板每孔换成2ml新鲜培养液(含有血清，不含抗生素)。可以使用含有血清并含有抗生素的新鲜培养液，但抗生素的存在对于有些细胞容易导致转染后出现一定的细胞毒性。
3. 参考下表，对于待转染的六孔板中每一个孔的细胞，取两个洁净无菌离心管，分别加入125µl不含抗生素和血清的DMEM培养液(高糖DMEM或低糖DMEM均可)或Opti-MEM® Medium，然后于其中一管加入2.5µg质粒DNA，并用枪轻轻吹打混匀；另一管加入5µl Lipo6000转染试剂，用枪轻轻吹打混匀，请特别注意不可Vortex或离心。室温静置5分钟后(通常最长不宜超过25分钟)，将含有DNA的培养液用枪轻轻吹打混匀，室温静置5分钟(室温存放6小时内稳定)。

注1：对于六孔板中一个孔的细胞，Lipo6000转染试剂的用量可以在3-12.5μl范围内进行适当调节，DNA用量建议固定在2.5 μg，但也可以在1-4μg的范围内进行适当调节。通常质粒用量(μg)和Lipo6000™(μl)的用量比例为1:2或1:3比较常用，如有必要 可以在1:0.5-1:5的范围内优化转染效果，上表推荐的比例为1:2，此时Lipo6000的用量相对较少，既经济又高效。最佳的转 染条件，因不同的细胞类型和培养条件而有所不同，可以在上述推荐范围内自行优化转染条件。注2：质粒的浓度宜控制在0.5-5μg/μl范围内。 注3：对于多个孔转染相同数量相同质粒的情况可以把每个孔所需的Lipo6000转染试剂和DNA混合物分别配制，然后一起混 合在同一个离心管内，后续混匀并孵育5分钟后，可以按照推荐用量滴加到细胞培养器皿内。 注4：对于其它培养板或培养器皿，各种试剂的用量可以按照细胞培养器皿的培养面积按比例进行换算。如果转染寡核苷酸或 RNA等可以参考转染DNA的条件进行。

4. 无论是贴壁细胞还是悬浮细胞，按照六孔板每孔250µl Lipo6000转染试剂-DNA混合物的用量，均匀滴加到整个孔内，随后轻轻混匀。
5. 为达到最高的转染效率，细胞在转染后培养4-6小时后宜更换为新鲜的完全培养液(对于Hela细胞，推荐在转染4小时后更换培养液，对于NIH3T3、CHO、HEK293T和HEK293FT细胞，推荐在转染6小时后更换培养液)。
6. 继续培养约24-48小时后，即可用适当方式检测转染效果，例如荧光检测、Western、ELISA、报告基因等，或加入适当的筛选药物如G418等进行稳定细胞株的筛选。
二、siRNA转染
1. 细胞培养(以六孔板为例，其它培养板或培养皿可参考六孔板)：在转染前一天(18-24小时)按照每孔约20-70万细胞(具体的细胞数量据细胞类型、大小和细胞生长速度等而定)接种到六孔板内进行培养，使第二天细胞密度能达到约30-50%。
2. 在进行下述转染步骤前，把培养有细胞的六孔板每孔换成2ml新鲜培养液(含有血清，不含抗生素)。可以使用含有血清并含有抗生素的新鲜培养液，但抗生素的存在对于有些细胞容易导致转染后出现一定的细胞毒性。
3. 参考下表，对于待转染的六孔板中每一个孔的细胞，取两个洁净无菌离心管，分别加入125µl不含抗生素和血清的DMEM培养液(高糖DMEM或低糖DMEM均可)或Opti-MEM® Medium，然后于其中一管加入100pmol siRNA，并用枪轻轻吹打混匀；而另一管加入5µl Lipo6000转染试剂，用枪轻轻吹打混匀，请特别注意不可Vortex或离心。室温静置5分钟后(通常最长不宜超过25分钟)，将含有siRNA的培养液用枪轻轻加入含Lipo6000转染试剂的培养液中，轻轻颠倒离心管或者用枪轻轻吹打混匀，室温静置5分钟(室温存放6小时内稳定)。

注1：对于六孔板中一个孔的细胞，Lipo6000转染试剂的用量可以在2.5-7.5μl范围内进行适当调节，siRNA用量可以在50-250pmol的范围内进行适当调节。通常siRNA用量(pmol)和Lipo6000(μl)的用量比例为20:1，如有必要可以在10:1-40:1的范围内优化转染效果，上表推荐的比例为20:1，此时Lipo6000的用量相对较少，既经济又高效。最佳的转染条件，因不同的细胞类型和培养条件而有所不同，可以在上述推荐范围内自行优化转染条件。注2：siRNA的推荐浓度为20µM，常用的浓度范围为10-50µM。注3：对于多个孔转染相同数量相同质粒的情况可以把每个孔所需的Lipo6000转染试剂和siRNA混合物分别配制，然后一起混合在同一个离心管内，后续混匀并孵育5分钟后，可以按照推荐用量滴加到细胞培养器皿内。注4：对于其它培养板或培养器皿，各种试剂的用量可以按照细胞培养器皿的培养面积按比例进行换算。如果转染寡核苷酸或RNA等可以参考转染DNA的条件进行。
4. 无论是贴壁细胞还是悬浮细胞，按照六孔板每孔250µl Lipo6000转染试剂-siRNA混合物的用量，均匀滴加到整个孔内，随后轻轻混匀。
5. 为达到最高的转染效率，细胞在转染后培养4-6小时后宜更换为新鲜的完全培养液(对于Hela细胞，推荐在转染4小时后更换培养液，对于NIH3T3、CHO、HEK293T和HEK293FT细胞，推荐在转染6小时后更换培养液)。
6. 继续培养3-5天后，即可用适当方式检测siRNA对于靶基因的下调效果，例如qPCR、Western、ELISA、报告基因等。

1. 使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率。
2. 转染前细胞必须处于良好的生长状态。
3. 需自备不含抗生素的无血清培养液或Opti-MEM®培养液或普通的DMEM培养液。
4. Lipo6000转染试剂不能vortex或离心，宜缓慢晃动混匀。
5. Lipo6000转染试剂使用后请立即盖好盖子，避免长时间暴露在空气中，影响转染效率。
6. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

7. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

8. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。 

备注：由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。

常用多孔板和培养皿的尺寸、培养面积、细胞培养量和推荐的培养体积等相关数据表：

*Diameter and growth area may vary depending on the manufacturer, and the listed sizes are from Corning.
**These wells or dishes are square.