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基本信息-
中文名称Lipo293F转染试剂(293系列悬浮细胞转染专用)
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英文名称Lipo293F Transfection Reagent
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保存温度2-8℃
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有效期1年
产品简介1. Lipo293F转染试剂(Lipo293 Transfection Reagent)是一种非常高效的基于阳离子脂质体的新型转染试剂，专门适用于悬浮培养的HEK293细胞，如Freestyle™ 293-F等，进行质粒转染和重组蛋白大量表达。本产品与Thermo公司的293fectin™ Transfection Reagent和Merck公司的293-Free™ Transfection Reagent的用途和使用效果基本一致，与Thermo公司的FreeStyle™ MAX Reagent相比，用于悬浮培养的293细胞时效果基本一致。
2. Lipo293F转染试剂对Freestyle™ 293-F细胞的转染效率非常高(约85%)，同时细胞毒性极低、重复性好、操作简单、转染后无需更换培养液。
3. Lipo293F转染试剂也同样适用于293系列贴壁细胞的转染，但转染293系列贴壁细胞时，推荐使用性价比更高的Lipo293（S11342）
4. Lipo293转染试剂转染时血清的存在不会影响转染效率，这样可以减少避免很多阳离子脂质体因为需要在转染时去除血清而对细胞造成的损伤。
5. Lipo293F转染试剂毒性极低，转染后无需更换培养液，一方面细胞的良好生长状态保证了目的蛋白的大量表达，另一方面又减少了操作步骤并节省了培养液。
6. Lipo293F转染试剂转染Freestyle™ 293-F细胞目的蛋白表达质粒后，通常在48-72小时后达到比较理想的蛋白表达水平。
7. Lipo293F转染试剂的转染效率可以通过转染表达EGFP等荧光蛋白的质粒进行快速鉴定。
操作步骤（仅供参考）1. Freestyle™ 293-F细胞的培养：在37℃，125rpm，8% CO2的摇床培养箱中培养；转染当天Freestyle™ 293-F细胞密度达到1.5-2.5×106个/ml时可以进行转染，但细胞存活率需>95%；可以使用碧云天生产的台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒(C0011)进行细胞存活率检测。
2. 以50ml悬浮培养的Freestyle™ 293-F细胞为例，取两个洁净无菌离心管，分别加入1.25ml不含抗生素和血清的Freestyle™ 293-F细胞培养液；然后其中一管加入50μg质粒DNA，另一管加入100μl Lipo293F转染试剂，分别用移液器轻轻吹打混匀，请特别注意不可Vortex或离心。将含有DNA的培养液用枪轻轻加入含Lipo293F转染试剂的培养液中，轻轻颠倒离心管或者用枪轻轻吹打混匀，室温静置15分钟(室温存放6小时内稳定)。
3. 把2.5ml Lipo293F转染试剂-DNA混合物全部加入到50ml悬浮培养的Freestyle™ 293-F细胞中。由于青霉素/链霉素双抗可能影响重组蛋白的表达，通常不建议在细胞转染时加入双抗；如细胞培养环境容易发生污染，可酌情加入1/5常规用量的双抗。
4. Freestyle™ 293-F细胞在37℃，125rpm，8% CO2的摇床培养箱中继续培养48-72小时后，即可收集细胞进行目的蛋白的检测和纯化。
常见问题1. 转染效率低
a. 优化质粒与Lipo293F转染试剂比例，有必要是可以适当尝试加大质粒用量。
b. 应使用高纯度、无菌、无污染物的质粒进行转染，DNA纯度方面A260/A280比值要接近1.8通常宜控制在1.8-1.9范围内，偏低则有可能有蛋白污染，偏高则有可能有RNA污染。
c. 需用无抗生素和无血清培养液配制Lipo293F转染试剂和质粒的混合物。
d. 转染后培养时间不足，而被误认为转染效率偏低。悬浮状态下的Freestyle™ 293-F细胞转染后至显著表达所需培养时间通常为48-72小时。
e. 检查细胞是否有支原体感染，支原体感染会影响细胞增殖，并很可能影响转染效率。
f. 如果没有检测到目的蛋白表达，应该仔细核对转染质粒的测序结果，确保测序结果和读码框完全正确。
g. 检查转染时细胞密度是否过高。
2. 细胞毒性较明显
a. 目的基因的表达蛋白有毒性。此时可以和空载体转染效果比较，以确定是否是目的基因蛋白表达对细胞产生毒性。如果确定有细胞毒性，可以考虑适当减少质粒用量，并按照比例减少Lipo293F转染试剂。
b. 检查转染时细胞密度是否太低。
c. 检查细胞是否有支原体等微生物污染。
注意事项1. 使用高纯度的DNA有助于获得较高的转染效率。对于质粒，可以使用质粒大量抽提试剂盒进行抽提，以保证可以获得较高的转染效率。
2. -20℃等低温保存后本产品会结冻，溶解时会出现沉淀，此时37℃水浴30min，使完全溶解就可以用于细胞转染，并且不会影响使用效果。收到的本产品可能会因为干冰等低温运输导致溶解后出现沉淀，37℃水浴30min，使完全溶解就可以正常使用了。如果37℃水浴30min还有少量沉淀，也可以直接混匀后使用，经测试并不会影响使用效果。
3. 转染前细胞必须处于良好的生长状态。
4. 需自备不含抗生素的无血清Freestyle™ 293-F细胞培养液，可以使用SMM 293-T1培养基(M293TI-1)。
5. Lipo293F 转染试剂不能vortex或离心，可以用移液器轻轻吹打混匀或缓慢摇动混匀。
6. Lipo293F 转染试剂使用后请立即盖好盖子，避免长时间暴露在空气中，影响转染效率。
6. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
7. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
8. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
备注：由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。
附表常用多孔板和培养皿的尺寸、培养面积、细胞培养量和推荐的培养体积等相关数据表：
