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斑马鱼产品
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基本信息-
产品名称Poly40000转染试剂
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保存温度2-8℃ 勿冷冻
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有效期1年
产品简介该产品核心成分为阳离子聚合物，其转染原理是带正电的阳离子聚合物与核酸中带负电的磷酸基团形成带正电的复合物，与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用，通过胞吞作用进入细胞。
产品优势质粒用量少、转染效率高、细胞毒性低、兼容血清和无血清转染方案、适用范围广（贴壁及悬浮细胞均适用），HEK293 贴壁及悬浮细胞系转染效果最佳。
操作步骤（仅供参考）一、 接种细胞
1. 贴壁细胞：转染前 18~24 h 进行细胞铺板，转染时细胞汇合度应在 70~80%；
2. 悬浮细胞：转染时细胞密度应在 3~5x106 cell/mL。
二、 准备转染复合物
1. 转染前将试剂置于室温 10 min。具体转染方法以 24 孔板为例（其他培养体系请参考表 1）；
2. 准备 2 个无菌 EP 管，分别在第 3、4 步骤中使用；
3. 将 1 μg 质粒稀释于 50 μL 无血清培养基中，混匀后室温放置 2 min；
4. 将 3 μL 转染试剂稀释于 50 μL 无血清培养基中，混匀后室温放置 2 min；
注：不能使用含血清培养基进行质粒和转染试剂的稀释！
5. 将稀释后的转染试剂逐滴加入到已稀释的质粒中，轻轻混匀；
注：此顺序不能反向进行！不可剧烈混匀！
6. 混匀后的复合物室温静置 20 min，以形成转染复合物。
表 1 不同培养体系对应的质粒、转染试剂、稀释液用量表
| 培养器皿 | 培养液(mL) | 质粒(μg) | 转染试剂(μL) | 稀释液(μL) |
| 48孔板 | 0.3 | 0.5 | 1.5 | 2×25 |
| 24孔板 | 0.5 | 1 | 3 | 2×50 |
| 12孔板 | 0.75 | 1.5 | 4.5 | 2×100 |
| 6孔板 | 1 | 3 | 9 | 2×200 |
| 35 mm培养皿 | 1 | 3 | 9 | 2×200 |
| 60 mm培养皿 | 3 | 6 | 18 | 2×250 |
| 100 mm培养皿 | 9 | 12 | 36 | 2×250 |
三、 转染细胞
1. 将上述转染复合物均匀加入含细胞的培养器皿中，轻轻摇匀后放入细胞培养箱中；
2. 转染后 8~12 h，适当补充新鲜完全培养基，使细胞保持活力；
3. 转染后 24~48 h 可检测到基因的表达。
注意事项1. 质粒质量：请务必使用高质量转染级无内毒素质粒。通过 OD260/280 比值确定 DNA 纯度（比值应在 1.8～2.0 的范围内）。
2. 细胞条件：保证良好的细胞状态，细胞状态的好坏将影响转染效率的高低。
3. 特殊细胞：对于接触抑制敏感的细胞，可适当降低铺板密度。
4. 质粒与转染试剂配比优化：质粒与转染试剂用量受细胞类型及其他条件影响，初次使用请先优化以获得最好的转染效率。质粒 μg:转染试剂 μL=1:3~1:6。
5. 我司生产的生化试剂如无特殊标注，基本为非无菌包装，若用于细胞实验，请提前做好预处理。需低温保存的产品，一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
6. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
7. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
8. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
备注：由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。
问题建议1. Q：转染前，细胞是否需要更换完全培养基？
A：不需要。
2. Q：悬浮细胞质粒用量多少？
A：建议 1~3 μg/mL。
