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斑马鱼产品
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产品简介■ AarI属于Type IIS型限制酶 ，是PaqCI的完全同裂酶 ，识别CACCTGC序列并在其下游进行切割 ，形成4碱基的5 ‘突出。不同于常规的Type IIS限制酶 ，AarI酶切需要两个或两个以上识别位点 ，搭配随酶附赠的激活剂可实现完全酶切 ，在没有激活剂的情况下可以酶切 ，但无法酶切完全。AarI的识别序列长达7碱基 ，在基因中的出现频率较低 ，尤其适合用于Golden Gate组装。
■ 酶活定义：1活性单位(U)是指在激活剂存在下 ， 50ul反应体系中 ，37℃ 1 h内完全酶切1ug λDNA所需的酶量。
5'...CACCTGC(N)4 ...3'
3'...GTGGACG(N)8 ...5'
同裂酶： PaqCI
注：同裂酶对于不同的甲基化修饰也许具有不同敏感性。
产品应用
1. DNA酶切流程
①冰上按照下表配制反应体系：
| ddH2O | Up to 50μl |
| 10×Reaction Buffer 或 10×Reaction Color Buffer | 5μl |
| 底物 DNA | 1μg |
| AarI(5U/μl)a | 1μl |
| AarI Activatorb | 1μl |
| Total | 50μl |
a. DNA底物中应不含苯酚，氯仿，乙醇，EDTA，洗涤剂或高浓度盐，否则会影响AarI酶活性。
b. AarI完全酶切需要1：1的比例加入和酶体积一致的激活剂，激活剂在电泳时表现为几十bp左右的条带，请避免误判为非特异性切酶。
② 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴。
③ 37℃温育 1-3h。
④ 80℃温育 20 min 即可使酶失活，停止反应，或者通过吸附柱或苯酚/氯仿纯化终止反应。
质量控制
| 质控项目 | 质控标准 |
| 功能活性检测 | 37℃下， 5U AarI能够在1h内完全消化1µg p615DNA |
| 超长时间温育测试 | 37℃下，将5U AarI与1µg p615DNA共同温玉育3h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解。延时酶切可能出现星号活性 |
| 酶切—连接—再酶切检测 | 37℃下，使用5U AarI消化底物，回收酶切产物。在22℃下使用适量T4 DNA Ligase(Fast)可以将超过95%酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开约95%以上的连接产物 |
不同 DNA 中的酶切位点数量
| λDNA | ΦX174 | pBR322 | pUC57 | pUC18/19 | SV40 | M13mp18/19 | Adeno2 |
| 12 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 9 |
甲基化修饰影响
| Dam | Dcm | CpG | EcoKI | EcoBI |
| 无影响 | 无影响 | 剪切受影响 | 无影响 | 无影响 |
产品组成| 组分 | 100U | Storage |
| AarI(5U/μl) | 20μl | -20℃ |
| AarI Activator | 20μl | -20℃ |
| 10× Reaction Buffer | 1ml | -20℃ |
| 10× Reaction Color Buffer | 1ml | -20℃ |
储存与保存1.保存：-20℃保存
2.有效期：2年
注意事项1. 对于被CpG甲基化的DNA ，剪切可能受阻。
2. 3 h温育未表现星号活性 ，更长时间酶切可能出现星号活性。
3. AarI是PaqCI的完全同裂酶。
4. AarI完全酶切需要两个或两个以上识别位点。
5. 反应体系中加入的酶体积不应超过总体积的10% ，避免酶中过多的甘油引起星号活性。
6. 限制性内切酶存储缓冲液中的添加剂（例如甘油、盐）与底物溶液中的污染物（例如盐、EDTA 或乙醇等）相同 ，反应体积越小 ，酶切反应抑制效应越强。
7. 同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性。
8. 失活条件:80℃温育20 min。
9. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
10. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
11. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
备注：由于产品信息可能会有优化升级，请以实际收货标签信息为准。
