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基本信息-
产品名称原代细胞siRNA/miRNA小核酸转染试剂
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保存-20°C 避光保存，有效期为 1 年；一周内多次使用可暂放于 2-8°C
产品简介原代细胞小核酸转染试剂可用来转染 siRNA、miRNA mimics、miRNA inhibitor 等 200bp以内的小分子 RNA，可转染绝大多数原代细胞。目前，无论国外还是国内，原代细胞的核酸转染都是个热点难题，市场还缺乏真正有效的商品化的原代细胞核酸转染试剂。原代细胞小核酸转染试剂 能够高效转染绝大多数原代细胞，获得比较理想的基因敲除效果。甚至对一些活体寄生虫幼虫，原代细胞小核酸转染试剂也能获得较为理想的转染结果。对于大多数原代细胞，原代细胞小核酸转染试剂的细胞转染阳性率都在 80%以上，而转染细胞死亡率不到10%。原代细胞小核酸转染试剂的使用也极其简便，先将sRNA与原代细胞小核酸转染试剂室温混合，再将siRNA-原代细胞小核酸转染试剂混合物直接加入含培养基的细胞，血清对转染效果没有影响，不必刻意添加或更换培养液。
产品特点1. 原代细胞转染性能：细胞转染阳性率一般在 80%以上，基因敲除效果明显，肝细胞 LaminA/C 基因敲除效率在 95%以上；
2. 极低的细胞毒性：转染细胞死亡率不到 10%，大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响；
3. 转染细胞范围广，绝大多数原代细胞都能获得比较理想的转染结果。
操作步骤（仅供参考）本说明书适用于 24 孔培养板的转染实验，其他规格的培养板的用量参照下面表格，表格给出的是每孔的用量与体积。
A. 细胞接种
转染前一天接种细胞，每孔 500μL 培养基，使细胞在转染时密度在 30-50%，尽量不要使用抗生素。
B. siRNA-PC-SiRNA/miRNA*混合物准备
1. 12pmoL siRNA 用 50μL 无血清培养基稀释。
2. 2μL PC-SiRNA/miRNA用 50μL 无血清培养基稀释。轻轻混匀，室温孵育 5min。
注意：确保在 25 min 内执行第三步操作，不要过于延迟。
3. 孵育 5min 后，将siRNA稀释液与原代细胞小核酸转染试剂稀释液混合（总体积 100μL）。轻轻混匀，室温孵育 20 min。
C. 将混合物加到培养的细胞内（完全培养基培养）
1. 将 100μL 混合物加入培养孔内，培养孔内含有 0.5mL 培养的细胞。轻轻晃动培养板，混匀。
2. 37°C 培养 18-72h，检测基因抑制效果。如果需要，细胞培养 4-6h 时可以更换培养基，但不是必须。
注意：孵育时间的长短，取决于细胞类型、 所干扰基因本身及分析方法。可设置不同的孵育时间进行实验以确定最佳孵育时间。
转染实验优化
为了提高转染效率，最好对转染条件进行优化，特别是首次使用。例如：24 孔培养板，siRNA 用量在 6、12、18、24、30pmoL (final concentration 10-50nM)之间调整，原代细胞siRNA/miRNA小核酸转染试剂用量在1.0 - 3.0μL之间调整。
转染实验要点
转染过程尽量不要使用抗生素，否则会导致细胞死亡增加；
首次实验 siRNA 的用量设置在终浓度 10nM、20nM、30nM、40nM、50 nM 进行摸索 ，后续实验根据实验结果修改。
PC-SiRNA/miRNA Transfection Reagent Formats for Various Cell Culture Vessel
Surface | VoL.of growth | VoL.of dilution | siRNA Amount | PC-SiRNA/miRNA (µl) | |
| 96-well | 0.3 | 100 | 2 × 10 | 2.4 | 0.4 |
| 48-well | 0.8 | 250 | 2 × 25 | 6 | 1 |
| 24-well | 2 | 500 | 2 × 50 | 12 | 2 |
| 12-wel | 4 | 1000 | 2 × 100 | 24 | 4 |
| 6-wel | 10 | 2500 | 2 × 250 | 60 | 10 |
PC-SiRNA/miRNA：原代细胞siRNA/miRNA小核酸转染试剂
注意事项1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
3. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
备注：由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。
