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斑马鱼产品
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基本信息-
产品名称高效原代细胞核酸转染试剂盒(可用于含血清培养基)
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保存-20°C 避光保存，使用前请轻轻混匀，有效期 1 年。（Trans buffer S 也可存放于 2-8℃）
产品简介HE-PCNA 具有非常卓越的转染性能，可高效转染绝大多数原代细胞，转染效率可高达 85%以上（EGFP 质粒）。该试剂功能强大，不仅可高效转染较大分子的质粒 DNA，还可高效转染 mRNA、siRNA、mimics 和各种小分子 DNA。与目前市场上常见的脂质体转染试剂不同，HE-PCNA 采用生物可降解材料配制，对细胞的毒性很低，转染后 24 小时细胞几乎无明显死亡。HE-PCNA 使用也非常方便，先将转染试剂与质粒 DNA 或 siRNA 混合，再将混合物直接加入培养细胞中，血清不影响其转染效果，不必刻意添加或更换培养液，操作十分简便。
产品特点1. 优异的细胞转染性能：可高效转染多种原代细胞，转染效率在原代细胞中可高达 85%以上；
2. 转染功能强大，不仅可高效转染大分子质粒 DNA，还可高效转染 mRNA、siRNA、mimics 和各种小分子 DNA；
3. 极低的细胞毒性：使用可降解生物材料，细胞毒性低，转染细胞死亡率不到 10%，大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响；
4. 操作简便，可用于含血清培养基培养细胞的转染，转染前后不需要更换培养液。
产品组成| 组分 | 规格 | |||
| HE-PCNA | 0.1ml | 0.5ml | 1ml | 1.5ml |
| 溶液A | 80µl | 0.40ml | 0.80ml | 1.2ml |
| Trans buffer S | 3ml | 15ml | 30ml | 45ml |
操作步骤（仅供参考）一、质粒DNA转染（以24孔板转染为例）
A. 细胞接种:
1. 转染前一天对细胞进行转接，每孔接种0.8-1.2×105个细胞，使转染时细胞密度为85%左右，且
生长良好（非常重要）；
2. 最好在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基，以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足
导致细胞死亡。
B. HE-PCNA/DNA转染复合物制备(该步完成后应立即进行转染):
1. 在1.5 ml无菌离心管中加入30µl Trans buffer S，再加入适量的转染试剂，见附表。用移液器轻
轻混匀后在室温静置5分钟。
2. 在1.5 ml无菌离心管中加入30µl Trans buffer S，并加入适量的溶液A，轻轻混匀，再加入适量的
DNA，见附表。用移液器再次轻轻混匀后在室温静置5分钟。
3. 将DNA-Trans buffer S混合物滴加至HE-PCNA-Trans buffer S混合物中，用移液器轻轻混匀后在室温静置15分钟后，立即转染。
注意：HE-PCNA-Trans buffer S混合物和DNA-Trans buffer S混合物的混合次序非常重要，切勿颠倒。
注意：离心管最好使用聚丙烯离心管。
C. 转染:
1. 将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中，边加边轻轻晃动培养板以使复合物均匀分布。加完后，立即将培养板转入培养箱继续培养。
2. 培养12小时后即可观察，最佳观察或收获时间为24~48小时。
3. HE-PCNA在完全培养基中仍有较高的转染效率，因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。
二、siRNA转染（以24孔板转染为例）
A. 细胞接种:
1. 转染前一天对细胞进行转接，使转染时细胞密度为30-50%左右，且生长良好、无支原体污染（非常重要）；
2. 最好在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基，以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致细胞死亡。
B. HE-PCNA/siRNA转染复合物制备(该步完成后应立即转染)：
1. 在1.5 ml无菌离心管中加入30µl Trans buffer S，并添加适量的转染试剂(见下表)。用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。
2. 在1.5 ml无菌离心管中加入30µl Trans buffer S，并添加适量的siRNA（见下表），用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。
3. 将siRNA-Trans buffer S混合物滴加至HE-PCNA-Trans buffer S混合物中，用移液器轻轻混匀后在室温静置15分钟后，立即转染。C. 转染:
1. 将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中，边加边轻轻晃动培养板。加完后，立即将培养板转入培养箱继续培养。
2. 37°C培养24-72h，检测基因抑制效果。如果需要，细胞培养4-6h时可以更换培养基，但不是必须。
3. HE-PCNA在完全培养基中仍有较高的转染效率，因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。
注意事项1. 首次转染，请务必进行优化实验，如24孔板质粒转染，每孔质粒用量0.8ug，HE-PCNA可选择2.0ul、2.5ul、3.0ul、3.5ul进行优化。24孔板siRNA转染，HE-PCNA用量2ul，siRNA用量可选10pmol、20pmol、30pmol、40pmol进行优化。
2. 进行质粒转染，接种细胞的数量应以确保转染时的细胞汇合度在80-90%为准，过高或过低均会影响转染效率。进行siRNA转染，接种细胞的数量应以确保转染时的细胞汇合度在30-50%为准。在制备DNA或siRNA转染复合物时，应避免体系中存在血清。培养体系中尽量不要添加抗生素，抗生素会导致培养细胞死亡。
3. 溶液A仅用于质粒转染，RNA或siRNA转染不需加入溶液A。
4. 请注意质粒转染和siRNA转染时对细胞密度和转染试剂用量等条件的差异，不要混用同一条件。
5. 如果需要质粒稳转，请在转染24-48h后加入筛选培养基。
6. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
7. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
8. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
备注：由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。
附表附表1：质粒转染不同培养体系推荐初始转染条件
| 培养皿 | 96孔板 | 48孔板 | 24孔板 | 12孔板 | 6孔板 | 10cm皿 | |
培养基、试剂、DNA量 | Trans buffer S (μl) | 2×6 | 2×15 | 2×30 | 2×60 | 2×120 | 2×600 |
| 溶液 A (μl) | 0.4 | 1.0 | 2.0 | 4.0 | 8 | 40 | |
| HE-PCNA (μl) | 0.5 | 1.3 | 2.5 | 5.0 | 10 | 50 | |
| 1μg/μl plasmid (μl) | 0.16 | 0.4 | 0.8 | 1.6 | 3.2 | 16 | |
| 完全培养基(ml) | 0.10 | 0.25 | 0.50 | 1.0 | 2.0 | 10 | |
附表2：siRNA转染不同培养体系推荐初始转染条件
| 培养皿 | 96孔板 | 48孔板 | 24孔板 | 12孔板 | 6孔板 | 10cm皿 | |
培养基、试剂、DNA量 | Trans buffer S (μl) | 2×6 | 2×15 | 2×30 | 2×60 | 2×120 | 2×600 |
| HE-PCNA (μl) | 0.4 | 1.0 | 2.0 | 4.0 | 8.0 | 40 | |
| siRNA (pmol) | 4 | 10 | 20 | 40 | 80 | 400 | |
| 完全培养基(ml) | 0.10 | 0.25 | 0.50 | 1.0 | 2.0 | 10 | |
HE-PCNA ：高效原代细胞核酸转染试剂
适用原代细胞：小鼠软骨细胞，大鼠软骨细胞，人关节软骨细胞，人肺静脉内皮细胞，人脐静脉内皮细胞，小鼠肺成纤维细胞，人肺癌上皮细胞，人乳腺癌上皮细胞，人结肠癌细胞，人气管上皮细胞，人肝癌细胞，人宫颈癌上皮细胞，前列腺癌上皮细胞，大鼠肺静脉平滑肌细胞，人肺动脉平滑肌细胞，大鼠心肌细胞，人纤维肉瘤细胞，大鼠骨骼肌细胞，人横纹肌肉瘤细胞，人胶质母细胞瘤细胞，人黑色素瘤细胞，人神经母细胞瘤细胞，小鼠肝癌细胞，小鼠胚胎成纤维细胞，等等。
