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斑马鱼产品
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基本信息-
产品名称高效悬浮细胞核酸转染试剂盒(可用于含血清培养基)
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保存-20℃避光保存，有效期 1 年，使用前请轻轻混匀
产品简介HESC-NA具有非常卓越的转染性能，可高效转染绝大多数悬浮细胞，在部分悬浮细胞中，转染效率可高达85%以上（EGFP质粒）。HESC-NA功能强大，不仅可高效转染较大分子的质粒DNA，还可高效转染mRNA、siRNA、mimics和各种小分子DNA。与目前市场上常见的脂质体转染试剂不同，HESC-NA采用生物可降解材料配制，对细胞的毒性很低，转染后24小时细胞几乎无明显死亡。HESC-NA使用也非常方便，先将转染试剂与质粒DNA混合，再将转染试剂-DNA复合物直接加入培养细胞中，血清不影响其转染效果，不必刻意添加或更换培养液，操作十分简便。
适用细胞系：293F、THP-1、RAW264、BMDM、CHO-S、Jurkat、K562、U937、NB4、MSCs等。
产品特点1. 卓越的细胞转染性能：可高效转染多种悬浮细胞，转染效率可在85%以上；
2. 转染功能强大，不仅可高效转染大分子质粒DNA，还可高效转染mRNA、siRNA、mimics和各种小分子DNA；
3. 极低的细胞毒性：使用可降解生物材料，细胞毒性低，转染细胞死亡率不到10%，大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响；
4. 操作简便，可用于含血清培养基培养细胞的转染，转染前后不需要更换培养液。
产品组成| 组分 | 规格 | |||
| HESC-NA | 0.1ml | 0.5ml | 1ml | 1.5ml |
| Trans buffer S | 0.08ml | 0.4ml | 0.8ml | 1.2ml |
操作步骤（仅供参考）一、质粒DNA转染（以24孔板转染为例）
A. 细胞接种：
1. 转染前一天或者两天接种细胞，接种细胞量为4-7×105个；
2. 确保转染时细胞比活度为90%以上，且生长状态良好；
3. 如果细胞在转染前一天铺板，转染时可以不用换液，如果细胞在转染前两天铺板，转染时最好换液。
B. HESC-NA /DNA转染复合物制备(该步完成后应立即进行转染)：
1. 在1.5ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基，再加入适量的转染试剂HESC-NA，见附表。用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。2. 在1.5ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基，并加入适量的溶液Trans buffer，轻轻混匀，再加入适量的DNA，见附表。用移液器再次轻轻混匀后在室温静置5分钟。
3. 将DNA-培养基混合物滴加至HESC-NA-培养基混合物中，用移液器轻轻混匀后在室温静置15~20分钟后，立即转染。
注意：HESC-NA-培养基混合物和DNA-培养基混合物的混合次序非常重要，切勿颠倒。离心管最好使用聚丙烯离心管。
C. 转染：
1. 将拟转染细胞强烈振荡20-40秒，确保培养细胞分散成单细胞悬液，无细胞结团。
2. 将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中，边加边轻轻晃动培养板以使复合物均匀分布。加完后，立即将培养板转入培养箱继续培养。
3. 培养24~96小时后观察或收获。
4. HESC-NA在完全培养基中仍有较高的转染效率，因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。因收获蛋白需要，可以使用悬浮细胞培养专用的无血清培养基。
二、siRNA转染（以24孔板转染为例）
A. 细胞接种：
1. 转染前一天对细胞进行转接，使转染时细胞密度为30-50%左右，且生长良好、无支原体污染（非常重要）；
2. 最好在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基，以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致细胞死亡。
B. HESC-NA /siRNA转染复合物制备 (该步完成后应立即转染)：
1. 在1.5ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基，并添加适量的转染试剂HESC-NA(见下表) 。用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。
2. 在1.5ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基，并添加适量的siRNA（见下表），用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。
3. 将siRNA-培养基混合物滴加至HESC-NA-培养基混合物中，用移液器轻轻混匀后在室温静置15~20分钟后，立即转染。
C. 转染：
1. 将拟转染细胞强烈振荡20-40秒，确保培养细胞分散成单细胞悬液，无细胞结团
2. 将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中，边加边轻轻晃动培养板。加完后，立即将培养板转入培养箱继续培养。
3. 37°C培养24-72h，检测基因抑制效果。如果需要，细胞培养4-6h时可以更换培养基，但不是必须。
4. HESC-NA在完全培养基中仍有较高的转染效率，因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。
注意事项1. 首次转染，请务必进行优化实验，如24孔板质粒转染，每孔质粒用量0.8ug，HESC-NA可选择2.0ul、2.5ul、3.0ul、3.5ul进行优化。24孔板siRNA转染，HESC-NA用量2ul，siRNA用量可选10pmol、20pmol、30pmol、40pmol进行优化。
2. 在制备 DNA 或 siRNA 转染复合物时，应避免体系中存在血清，因血清会干扰HESC-NA与DNA或 siRNA 形成复合物。培养体系中尽量不要添加抗生素，抗生素会导致培养细胞死亡。
3. Trans buffer仅用于质粒转染，RNA或siRNA转染不需加入溶液Trans buffer。
4. 请注意质粒转染和 siRNA 转染时对细胞密度和转染试剂用量等条件的差异，不要混用同一条件。
5. 悬浮细胞转染难度大，且受细胞种类、细胞密度、细胞生长情况、培养方法、操作手法等因素的影响，研究者在转染之前，应查阅相关文献，认真准备转染方案，并对转染效果有比较理性的判断。
6. 本产品适合于质粒 DNA、siRNA 分别独立转染，如需质粒 DNA、siRNA共转，请选择相应的核酸共转染试剂盒。
7. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
8. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
9. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
备注：由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。
附表附表1：质粒转染不同培养体系推荐初始转染条件
| 培养皿 | 96孔板 | 48孔板 | 24孔板 | 12孔板 | 6孔板 | 10cm皿 | |
培养基、试剂、DNA量 | 无血清培养基(μl) | 2×10 | 2×25 | 2×50 | 2×100 | 2×200 | 2×1000 |
| Trans buffer(μl) | 0.4 | 1.0 | 2.0 | 4.0 | 8 | 40 | |
| HESC-NA (μl) | 0.5 | 1.3 | 2.5 | 5.0 | 10 | 50 | |
| 1μg/μl plasmid (μl) | 0.16 | 0.4 | 0.8 | 1.6 | 3.2 | 16 | |
| 完全培养基(ml) | 0.10 | 0.25 | 0.50 | 1.0 | 2.0 | 10 | |
附表2：siRNA转染不同培养体系推荐初始转染条件
| 培养皿 | 96孔板 | 48孔板 | 24孔板 | 12孔板 | 6孔板 | 10cm皿 | |
培养基、试剂、DNA量 | 无血清培养基(μl) | 2×10 | 2×25 | 2×50 | 2×100 | 2×200 | 2×1000 |
| HESC-NA (μl) | 0.4 | 1.0 | 2.0 | 4.0 | 8.0 | 40 | |
| siRNA (pmol) | 4 | 10 | 20 | 40 | 80 | 400 | |
| 完全培养基(ml) | 0.10 | 0.25 | 0.50 | 1.0 | 2.0 | 10 | |
HESC-NA：高效悬浮细胞核酸转染试剂（High Efficiency Suspension Cell Nucleic Acid Transfection Reagent）
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