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基本信息-
产品名称活性氧(ROS)检测试剂盒(DCFH-DA荧光法)
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保存温度-20℃ 避光
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有效期1年
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应用用于氧化应激,代谢疾病,铁死亡的检测
产品简介活性氧(Reactive Oxygen Species, ROS)包括超氧化物、过氧化氢、羟自由基以及具有高氧化活性的活性氧代谢产物。活性氧主要由中性粒细胞、巨噬细胞、单核细胞为代表的免疫细胞受到刺激后产生，其它体细胞在应激条件下线粒体电子传递异常也会产生活性氧。免疫细胞产生的活性氧能够抵御微生物的感染。在病理条件下，过度产生的活性氧也会导致机体损伤和引发各种疾病。
活性氧检测试剂盒(Reactive Oxygen Species Assay Kit，也称ROS Assay Kit)是一种利用荧光探针 DCFH-DA 进行活性氧检测的试剂盒。DCFH-DA 本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成 DCFH。而DCFH 不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的 DCF，通过检测 DCF 的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平，从而用于病理生理研究或药物筛选。用流式细胞仪或荧光显微镜可直接观察，是一种经典活细胞中活性氧的检测方法。本试剂盒利用能够刺激多种免疫细胞产生活性氧的佛波酯(PMA)为阳性对照，灵敏度高，线性范围宽，使用方便。
产品组成| 组分 | 100T | 500T | 保存温度 |
| 试剂(A): DCFH-DA 溶液(10mM) | 0.1ml | 0.5ml | -20℃ 避光 |
| 试剂(B): PMA 溶液(1000×) | 0.05ml | 0.3ml | -20℃ 避光 |
操作步骤（仅供参考）自备材料
1. 细胞、纯化的线粒体、细胞培养用 PBS 或无血清细胞培养液
2. 系列可调节量程移液器及吸头、离心管、24 孔板、细胞培养箱
3. 流式细胞仪、荧光酶标仪、荧光分光光度计、激光共聚焦显微镜、荧光显微镜等
操作步骤(仅供参考)
操作步骤略，如需完整版请咨询客服。
注意事项1. 初次使用试剂时，请适当离心后使用。
2. 活性氧阳性对照(PMA)仅仅用于作为阳性对照的样品，并不是在每个样品中都需加入活性氧阳性对照。
3. 初次测定活性氧，可取小鼠骨髓细胞，1×106 细胞/孔，接种到24 孔板中，加入1ml无血清培养基稀释 1000 倍的 DCFH-DA，然后再加入 1ul PMA 溶液(1000×)刺激30-60min，检测活性氧作为阳性对照。通常刺激后 0.5-4h 可观察到显著的活性氧水平升高。对于不同的细胞，活性氧阳性对照的效果可能有较大的差别。如果在刺激后30min内观察不到活性氧的升高，可以适当提高活性氧阳性对照的浓度。如果活性氧升高得过快，可以适当降低活性氧阳性对照的浓度。
4. 对于某些细胞，如果发现没有刺激的阴性对照细胞荧光也比较强，可以按照1:2000-1:5000 稀释 DCFH-DA，使装载探针时 DCFH-DA 的浓度为2-5μM。探针装载的时间也可以根据情况在 15-60min 内适当进行调整。
5. 探针装载后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。
6. 探针装载完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的装载情况是否良好。
7. 尽量缩短探针装载后到测定所用的时间(刺激时间除外)，以减少各种可能的误差。
8. 荧光酶标仪检测时须使用适合荧光检测的黑板或白板。
9. 如果定量的话需要制作标准曲线。先做一个不同浓度 H2O2 氧化DCFA 荧光值，做一条标准曲线，X 轴为 H2O2浓度，Y 轴是荧光值，得出一个方程，再看样品的荧光值即Y值是多少，对应的 X 值即对应的 H2O2 浓度。
11. 实验组荧光值不高可能是因为在装载探针后有的细胞容易漂起来，洗细胞时一部分细胞会被吸走。所以在种细胞时可以把细胞量增加一倍，这样细胞紧密连接，贴壁比较牢，荧光值就高了。
12. 我司生产的生化试剂如无特殊标注，基本为非无菌包装，若用于细胞实验，请提前做好预处理。需低温保存的产品，一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
13. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
14. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
15. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
备注：由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。
