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斑马鱼产品
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基本信息-
产品名称磷酸钙法细胞转染试剂盒
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保存温度按试剂盒各组分温度保存
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有效期1年
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应用用于磷酸钙法转染细胞,适合于大多数贴壁细胞的转染
产品简介外源基因导入真核细胞的方法有很多种，如磷酸钙转染法、DEAE-葡聚糖转染法、脂质体法、电穿孔法、显微注射法等。本品磷酸钙法细胞转染试剂盒(CalciumPhosphateCell Transfection Kit)是在传统的磷酸钙细胞转染方法的基础上进行了改良，提高了转染效率，并降低了毒性，可用于磷酸钙法转染细胞，不仅可以瞬时表达，也可以筛选稳定株，HEK293 是最适合磷酸钙法转染的细胞之一，优化条件后转染效率可以高达85%以上，一般的转染效率可达 40～50%左右；其他常见细胞(例如 Hela、CHO 细胞等)也适合磷酸钙法转染，但效率比 293 细胞要略低一些。
本品磷酸钙法细胞转染试剂盒主要适合于大多数贴壁细胞的转染，也可于一些悬浮细胞的转染，一般要求 DNA 浓度在 10～50μg 为宜，Hela、BALB 等细胞沉淀放置16h，CHO、DUKX、BⅡ等细胞可以通过甘油、DMSO 进行热休克处理以提高转染效率。
产品组成| 组分 | 200T | 保存温度 |
| 试剂(A): Calcium Chloride Solution | 20ml | 2-8℃ |
| 试剂(B): BBS Solution | 20ml | -20℃ |
操作步骤（仅供参考）自备材料
胰蛋白酶消化液、完全培养基、PBS、无菌水
操作步骤(仅供参考)
(一)贴壁细胞转染：
1. 在转染前 24h 用胰蛋白酶消化培养细胞，取适量对数期细胞转移至新的培养器皿中，待细胞密度达 70～80%即可进行转染。后续操作步骤均按 6 孔板计算，如果转染器皿不同，请按比例自行调节用量。
2. 在加入 DNA 之前 2～4h，加入 2ml 不含抗生素的完全培养液，置于37℃5%CO2 培养箱培养。
3. 取 2～6μg DNA(体积不宜超过 20μl)加入 100μl Calcium Chloride Solution，混匀，即为 DNA-CaCl2 溶液。
4. 取 BBS Solution 100μl，用移液器一边吹打 BBS Solution，一边逐滴加入DNA-CaCl2溶液(操作缓慢，一般在 1～2min)。
5. 室温静置 20～30min，即为 DNA-CaCl2-BBS 溶液，此时可能出现极其微小颗粒沉淀。
6. 取 DNA-CaCl2-BBS 溶液底部物质均匀加入到 6 孔板细胞中，轻轻晃动混匀。
7. 置于 37℃ 5% CO2培养箱培养 4～16h；如果培养细胞为 CHO、DUKX 等，可以DMSO或甘油进行休克处理，转染效率会大大增加，即培养 4～6h 后，用2ml 含10%甘油或20%DMSO 的完全培养液替换当前培养液，室温下静置 3min，加5ml PBS 摇动混匀。
8. 去除培养液，用 PBS 清洗细胞 2 次，加入 2ml 完全培养液继续培养，一般24h 后可见转染细胞的表达。
(二)悬浮细胞转染：
1. 低速离心收集悬浮细胞，用 PBS 洗涤 1 次。
2. 取 2～6μg DNA(体积不宜超过 20μl)加入 100μl Calcium Chloride Solution，混匀，即为 DNA-CaCl2 溶液。
3. 取 BBS solution 100μl，用移液器一边吹打 BBS Solution，一边逐滴加入DNA-CaCl2溶液(操作缓慢，一般在 1～2min)。
4. 室温静置 20～30min，即为 DNA-CaCl2-BBS 溶液，此时可能出现极其微小颗粒沉淀。
5. 每 106个细胞沉淀用 100μl DNA-CaCl2-BBS 溶液重新悬浮，室温放置20～30min。
6. 6 孔板每孔加入 2ml 不含抗生素的完全培养基，取 DNA-CaCl2-BBS 溶液底部物质均匀加入到 6 孔板中，轻轻晃动混匀。
7. 置于 37℃ 5% CO2培养箱培养 4～16h，去除培养液，用 PBS 清洗细胞2 次，加入2ml完全培养液继续培养，一般 24h 后可见转染细胞的表达。
注意事项1. 注意无菌操作，尽量避免污染，同时 DNA 不应含有蛋白和酚。
2. 休克处理某些细胞系会使转染效率大大提高，但应注意甘油暴露过久易导致细胞死亡。
3. 转染 12～24h 后，可以加入终浓度为 10mmol/L 的丁酸钠溶液，可以提高病毒滴度。
4. BBS Solution 的 pH 值直接关系到转染效率，尽量避免长时间暴露在空气中，以免被空气中的二氧化碳酸化。
5. 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
6. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
7. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
8. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
备注：由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。
