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FITC 异硫氰酸荧光素(偶联级,≥95% (HPLC))  Cite:228    分享
Fluorescein Isothiocyanate 同类产品满5赠1  

货号： FR0122
复制产品信息
  • CAS：3326-32-7
  • 分子式：C21H11NO5S
  • 分子量：389.38
  • 纯度：≥95% (HPLC)
规格:
10MG 50MG
单位:
瓶
单价:￥138.00
基本信息
产品简介
操作步骤（仅供参考）
注意事项
基本信息
  • 中文名称
    FITC 异硫氰酸荧光素
  • 英文名称
    Fluorescein Isothiocyanate
  • CAS
    3326-32-7
  • 分子式
    C21H11NO5S
  • 分子量
    389.38
  • 级别
    偶联级
  • 纯度
    ≥95% (HPLC)
  • 溶解性
    微溶于丙酮、乙醚和石油醚。不溶于水。
  • 性状
    黄色或橙色粉末，有吸湿性
  • 保存温度
    2-8℃
  • 有效期
    2年
产品简介

异硫氰酸荧光素FITC，英文全称Fluorescein Isothiocyanate，是生物学中应用最为广泛的一种绿色荧光素衍生物。 FITC具有高吸收率、优良的荧光量子产率和良好的水溶性等特点。FITC的异硫氰酸基团可与蛋白质上的氨基、巯基、咪 唑、酪氨酰、羰基等基团相结合，从而实现包括抗体，凝集素在内的蛋白标记。FITC除了用作蛋白质标记物，还可用 作蛋白质荧光示踪剂，通过标记抗体而快速鉴定病原体，或是用于蛋白质和多肽（HPLC）的微量测序。FITC的最大激发 波长为494 nm。一旦激发，在最大发射波长520 nm处呈黄-绿色荧光。

操作步骤（仅供参考）

原液制备
1. 蛋白准备
 为了获得最佳标记效果，请将蛋白 (抗体) 浓度配制为1mg/mL。
a 蛋白溶液PH值应为8.5±0.5，若pH低于8.0，则用1M碳酸氢钠进行调整。
b 若蛋白浓度低于1mg/mL，标记效率会大大降低，为了获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为1-10mg/mL。
c 蛋白必须在不含伯胺 (如 Tris 或甘氨酸) 和铵离子的缓冲液中，否则会影响标记效率。
2. 染料准备
将无水二甲基亚砜加入FITC小瓶中，制成10mM 储备溶液，震荡摇匀。
注：FITC要现配现用，避光。
3. 染料用量计算
标记反应所需的FITC用量取决于要标记蛋白的用量，FITC与蛋白的最佳质量比为1:50左右。 例：假如所需标记蛋白1mL，2mg/mL的IgG(MW=150,000)，用1mL DMSO溶解一管1mg FITC，则所需FITC体积为40μL。
计算公式：
Molar F/P=(MW/389)*(A495/195)/{[A280-(0.35*A495)]/E0.1%}=(A495*C)/[A280-(0.35*A495)]
C=(MW*E0.1%280)/(389*195)
注：
C：一种蛋白质常数
MW：蛋白质分子量
389：FITC的分子量
195：FITC偶联物在pH=13,490 nm处的吸光值E0.1%
(0.35×A495)：基于FITC A280的校正因子
E0.1%：蛋白(1.0mg/mL)在280 nm处的吸光值
使用说明
1. 标记反应
a 取算好体积的新鲜配制的50μL FITC缓慢加入到1mL蛋白样品溶液中，轻轻摇匀混合，然后短暂离心将样品收集 在反应管底部。切忌剧烈混匀，防止蛋白样品变性失活。
b 将该反应小管置于避光处，在室温条件下轻轻摇晃孵育8h，每隔30分钟，将反应小管轻轻颠倒几次，以充分混合 两种反应物，提高标记效率。
c 加入5 的NH4Cl 至终浓度 50mM，4℃终止反应2h。
2. 蛋白纯化脱盐以下方案以使用Sephadex G-25柱纯化染料蛋白偶联物为例。
a 按照生产说明书制备Sephadex G-25柱。
b 将反应混合物装入Sephadex G-25色谱柱顶部。
c 当样品运行到顶部树脂表面下方时，立即加入PBS (pH 7.2-7.4)。
d 向所需样品中加入更多的PBS (pH 7.2-7.4)，完成柱纯化。结合物含有所需要的染料

注意事项

1. FITC对光及湿度敏感。即用即配FITC溶液并丢弃未使用的部分。
2. 低浓度的叠氮化钠 (≤3mM 或0.02％) 或硫柳汞 (≤0.02mM或0.01％) 不会显著干扰蛋白标记；但是20-50％的甘油会降低标记效率。
3. 避免使用含伯胺 (例如Tris，甘氨酸) 或铵离子的缓冲液，它们与待标记蛋白竞争反应。
2. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
3. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
4. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。

备注：由于产品信息可能会有优化升级，请以实际收货标签信息为准

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