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人正常小肠上皮细胞FHs 74 Int  Cite:0    分享
Human Small Intestinal Epithelial Cells ,FHs74Int

货号: EC-FHs74Int
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规格:
1×10⁶/T25瓶 冻存管
套餐:
官方标配(单独细胞)
单价:¥5000.00
产品简介
基本信息
收货须知
细胞培养步骤
细胞售后说明
注意事项
产品简介

■ FHs 74 Int是一种显示上皮形态的细胞系,正常二倍体细胞。分离自妊娠3至4个月的女性患者的小肠。PAS阴性。免疫过氧化物酶染色显示细胞角蛋白呈阴性。该细胞为正常的二倍体细胞,不具备无限增殖的能力。建议用户收到细胞后,在细胞倍增5-8次内完成实验。
■ 推荐专用培养基:人正常小肠上皮细胞FHs74Int专用培养基EM- FHs74Int

基本信息
  • 细胞来源
    人 女性 小肠
  • 细胞形态
    上皮细胞样 贴壁生长
  • 细胞含量
    >1x10^6 细胞数
  • 规格
    T25瓶或者1mL冻存管包装
  • 保存条件
    T25瓶(培养箱短期) / 冻存管(液氮长期保存)
  • 运输条件
    常温运输(活细胞) / 干冰运输(冻存细胞)
收货须知

1. 收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。

2. 请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。

3. 贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

4. 备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代 。

细胞培养步骤

一.培养基及培养冻存条件准备

1. 准备Hybri-Care Medium (ATCC, 46-X)培养基;优质胎牛血清,10%;添加30ng/ml EGF;双抗,1%;

2. 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。细胞消化时间3-4min。传代比例1:2,传代周期4天左右

3. 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。

二.细胞处理

1. 冻存细胞的复苏

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2. 细胞传代
如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:

a 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 

c 轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3. 细胞冻存
收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

下面T25瓶为例:

a 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10^6~1×10^7个活细胞/ml.

b 1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×10^6~1×10^7个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。

c 将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

细胞售后说明

一、细胞出现问题,可重发的情况有哪些?判定标准是什么?
 1. 细胞运输途中遭遇的各种问题,细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等,重发。
 2. 细胞污染问题,请在收到产品48小时内,给我们提出真实的实验结果,核实后重发。
 3. 常温发货的细胞静置24小时后,干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后,绝大多数细胞未存活,(需提供真实清晰的细胞状态照片),重发。
 4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封,出现污染, 重发。
 5. 细胞活性问题,请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果,用台盼蓝染色法鉴定细胞活力,核实后予重发。
 6. 细胞收到当天以及第2、3天请拍照,3天未告知的,视为产品合格。4-7天内出现问题有提 供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的,并跟技术人员沟 通的,由技术人员判定为我方责任的,重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处 理或者按合同价的50%收费重发。
 7.视具体情况而定。
 二、细胞出现问题,不予以重发的情况有哪些?
 1. 客户造成细胞污染,不重发。
 2. 客户不正确操作致细胞状态不好,不重发。
 3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好,不重发。
 4. 细胞状态不好,未提供细胞培养前3天照片的,不重发。
 5. 细胞培养时经其它处理的,不重发。
 6. 细胞收到2天内,未告知,不重发。
 7. 视具体情况而定。

注意事项

1.收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。

2.收到细胞先不开瓶盖,瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时(视细胞密度而定)稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收细胞时就整体外观拍一张照片,观察培养基的颜色和是否有漏液情况,随后在显微镜下拍下细胞状态,100*,200*各一张),观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。

3.由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响,故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态,故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明,期间间隔时间不能大于7天。

4.所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

5. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

6. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

7. 实验结果可由多种因素影响,相关处理只限于产品本身,不涉及其他赔偿。

 

备注:由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。

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