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基本信息-
中文名称His标签蛋白琼脂糖凝胶(IDA-Co)
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基质高度交联的 4%琼脂糖凝胶
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配体亚氨基二乙酸（IDA）
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螯合金属离子Co2+
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载量>30mg 6xHis 蛋白
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粒径45∽135μm
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耐压流速80∽150cm/h（0.3MPa，3bar）
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浓度凝胶体积占悬浮液体积的 50%
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储存缓冲液含 20%乙醇的 1xPBS
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保存温度2-8℃
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有效期2年
产品简介His 标签蛋白琼脂糖凝胶（IDA-Co）可以用于各种表达来源（如大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞）的组氨酸标签（6xHis-tag）蛋白的纯化。它是由高度交联的 4%琼脂糖凝胶为基质，通过化学方法偶联了三配位的亚氨基二乙酸（IDA），螯合钴离子（Co2+）后，可以形成比较稳定的平面四边形结构，从而有更多的位点与组氨酸标签上的咪唑环继续配位，达到结合目的蛋白的效果。
操作步骤（仅供参考）操作流程
1. 准备 buffer
结合/平衡缓冲液、洗涤缓冲液和洗脱缓冲液等缓冲液请自行准备或购买我司 His 标签蛋白纯化试剂盒。
2. 样品准备
以大肠杆菌表达系统，500mL 诱导菌液为例。
1) 4℃离心 30min（4000xg）收集菌体，弃上清。
2) 用预冷结合/平衡缓冲液重悬菌体，如果需要，可加入适量的抑制剂，如蛋白酶抑制剂（PMSF）或其他蛋白酶抑制剂等。
注意：加入的抑制剂不能对 His 标签蛋白琼脂糖凝胶(IDA-Co)的性能有影响，破碎液中不能含有 EDTA、EGTA 等螯合剂，DTT、巯基乙醇等还原剂，尿素、盐酸胍等变性剂。
3) 用超声波破碎法在冰上破碎菌体，直到样品破碎完全。
可选：如果裂解物太粘稠，可以加入 RNase A（终浓度10μg/mL）和 DNase I（终浓度 5μg/mL）并在冰上孵育 10∽15min。
4) 4℃离心 20min（12,000xg），分离上清和沉淀，并过滤除杂。将上清和沉淀留样以备后续检测。
3. 纯化重组 His 标签融合蛋白
1) 轻轻重悬 His 标签蛋白琼脂糖凝胶(IDA- Co)。
2) 吸取2mL的His 标签蛋白琼脂糖凝胶(IDA- Co)加至层析柱中，用 10mL 结合/平衡缓冲液平衡 His 标签蛋白琼脂糖凝胶(IDA- Co)。重复上述步骤 1 次。
3) 关闭层析柱下出口，将制备好的含有 His 标签蛋白上清加入到层析柱中，再盖紧层析柱上进口，建议封口膜密封。置于混匀仪上，室温孵育 1∽2h。（也可置于 2∽8℃孵育 2∽4h 或者过夜）
4) 孵育结束后，打开层析柱上下进出口，待上清液全部流出层析柱后，收集上清液，作为流穿，置于 2∽8℃，以备后续检测。
5) 立刻加入10mL洗涤缓冲液至层析柱中，收集洗杂液，置于 2∽8℃，以备后续检测。重复上述步骤 4 次。
6) 常规洗脱：加入 1mL 洗脱缓冲液，用 1.5mL 的 Ep管收集洗脱液。分别收集 5∽10 管。
备注:如需优化洗脱步骤，也可采用梯度洗脱方式。
梯度洗脱：采用不同浓度咪唑分别进行洗脱，并收集洗脱液。
7) SDS-PAGE 检测将得到的样品（包括流穿、洗涤液和洗脱液）以及原始样品使用 SDS-PAGE 检测纯化效果。加入适量蛋白快速染色液浸没 PAGE 胶，然后置于摇床上摇动，染色 10∽30min 即可观测结果。
注：目的蛋白保存前应透析或者超滤以去除咪唑等杂质，再分装冻存到-80℃。
（可选）凝胶再生及储存
凝胶再生步骤请参考或直接购买我司 His 标签蛋白纯化再生试剂盒。
凝胶再生后，可以立即使用，如不立即使用，需要将凝胶悬浮于等体积的 20%乙醇中，置于 2∽8°C 保存。
注意事项1. 进行实验操作之前，请务必认真阅读本操作说明书。
2. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
3. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
4. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
备注：由于产品信息可能会有优化升级，请以实际收货标签信息为准
