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抗体蛋白
二抗生物素标记 过氧化物酶(HRP)标记 胶体金试剂 FITC荧光标记 RBITC荧光标记 二抗免疫血清 其它荧光标记二抗 藻红蛋白(PE)荧光标记 胶体金(Gold)标记 SAlexa Fluor荧光系列 碱性磷酸酶(AP)标记 别藻蓝蛋白(APC)荧光标记 其它标记 PE标记二抗 DyLight标记二抗 AU标记二抗 Biotin标记二抗 AMCA标记二抗 Texas Red标记二抗 TRITC标记二抗 HRP标记二抗 未标记二抗 Cy标记二抗 AbBox Fluor标记二抗内参抗体 小分子抗体
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中文名称链霉亲和素琼脂糖磁珠
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基质高度交联的 4%磁性琼脂糖磁珠
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配体重组 Streptavidin 蛋白
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浓度磁珠体积占悬浮液体积的 20%
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粒径30∽100μm
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耐压流速80∽150cm/h(0.3MPa,3bar)
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结合能力①分离纯化:结合生物素化蛋白、抗体等;②分子相互作用:IP,Co-IP,RNA Pulldown等。
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保存温度2-8℃ 勿冷冻
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有效期2年

链霉亲和素琼脂糖磁珠,也称 SA 琼脂糖磁珠,是专为高效、快速纯化生物素化配体而设计的新型磁性微球产品,可以在磁场作用下直接从生物样品中一步纯化出高纯度的目标分子,极大的简化了纯化工艺和提高纯化效率,适合科研和工业客户高通量地进行生物素化分子的纯化。利用生物素与链霉亲和素配体之间的相互作用纯化生物素或生物素化的蛋白、抗体等物质。链霉亲和素与生物素之间的亲和力很强,需要在变性条件下洗脱,链霉亲和素对亚氨基生物素的亲和力相对较弱,可以在pH9.5-11.0 结合,pH4.0 时洗脱,不需要使用变性剂所以能更好的保持亲和素偶联物的活性。
链霉亲和素琼脂糖磁珠主要用于分离纯化生物素标记的核酸、抗体、蛋白或相关复合物等,也可用于免疫沉淀(IP)、细胞分选、DNA-蛋白相互作用研究等。

(一)生物素化分子纯化操作流程
1. 使用前准备
1.1 缓冲液:
生物素或生物素化分子的纯化
缓冲液 | 配方 |
平衡/洗杂液 | 0.15M NaCl,20 mM Na2HPO4,pH 7.2 |
洗脱液 | 8M 盐酸胍,pH1.5 |
注:盐酸胍洗脱与 SDS 会产生沉淀,若进行 SDS-PAGE 跑胶请
不要使用盐酸胍洗脱,直接使用 0.1%SDS 煮沸 5min。
亚氨基生物素标签分子的纯化
缓冲液 | 配方 |
平衡/洗杂液 | 0.5M NaCl,50mM 碳酸铵,pH 10.0 |
洗脱液 | 0.5M NaCl,50mM 碳酸铵,pH 4.0 |
1.2 漩涡振荡器、旋转混合仪、移液器、枪头及磁力架
2. 样品准备
上样之前要确保样品溶液有合适的离子强度和 pH 值,用平衡/洗杂液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释,或者将样品置于平衡/洗杂液透析。样品在上样前建议离心并用0.22μm 或 0.45μm 滤膜过滤,减少杂质,提高蛋白纯化效率。
3. 磁珠准备
1)将磁珠反复颠倒,充分混匀,使用移液器取适量的磁珠悬浮液,置于离心管中,将离心管置于磁力架,大约 1min,待溶液变澄清后,弃上清。
2)再将离心管从磁力架上取下来,加入 5~10 倍磁珠体积平衡/洗杂液,吹打 5~10 次,将离心管置于磁力架上,大约 1min,待溶液变澄清后,弃上清,重复洗涤 2 次。
4. 样品纯化
1)孵育:将生物素化的样品加入到处理好的磁珠中,颠倒混匀。将离心管置于旋转混合仪上,室温孵育 30min 以上(具体时间根据结合效果调整)。
2)洗杂:孵育结束后,将离心管置于磁力架上,吸取上清液,作为流穿,置于 2∽8℃,以备后续检测。向离心管中加入 10 倍磁珠体积的平衡/洗杂液,置于旋转混合仪上,洗涤 5~15min。洗涤结束后,将离心管置于磁力架上,收集洗杂液,置于 2∽8℃,以备后续检测。重复上述步骤2 次以上。
3)洗脱:加入 3~5 倍磁珠体积的洗脱液混合均匀,置于旋转混合仪上,洗脱 5~15min。将离心管置于磁力架上,用 1.5mL 的 Ep 管收集洗脱液。分别收集 2∽5 管。
4)SDS-PAGE 检测将使用纯化产品得到的样品(包括流穿组分、洗杂组分和洗脱组分)以及原始样品使用 SDS-PAGE 检测纯化效果。
(二)生物素化抗体免疫沉淀操作流程
注意:缓冲液自行准备或直接购买我司 IP 试剂盒。
免疫复合物的制备
注意:样品所需的量和孵育时间均依赖于每个特定的抗体抗原体系,因而可能需要优化才能得到最大产量。
以下实验方案针对 2∽10μg 生物素化抗体,根据需要可以按比例放大
1. 在离心管中,将每个样品的细胞裂解液与 2∽10μg 生物素化抗体结合。每个免疫沉淀反应推荐的总蛋白量为 500∽1500μg。
2. 用IP Lysis/Wash Buffer将抗体以及制备好的样品稀释至 300∽500μL。
3. 在室温下孵育 1∽2h,或 4℃ 2∽4h,以形成免疫复合物。
免疫沉淀
注意:为保证磁珠均匀分布,使用前通过反复颠倒或轻微涡旋混匀瓶中磁珠。
1. 将 10∽20µL 的 Biolinkedin® 链霉亲和素琼脂糖磁珠加入 1.5mL 离心管中。
2. 向磁珠中加入 500µL 预冷 PBS,轻柔混匀。
3. 将离心管放入磁力架中收集磁珠到离心管的一边。去除上清。
4. 向离心管中加入 200∽500µL IP Lysis/Wash Buffer。颠倒离心管数次或轻微涡旋混匀 1min。用磁力架收集磁珠。去除上清。
5. 将抗原样品/抗体混合物加入装有磁珠的离心管中,保持混匀室温下孵育 1∽2h,或 4℃ 2∽4h。
6. 用磁力架收集磁珠,除去未结合的样品,保存以备分析。
7. 向离心管中加入 1000µL IP Lysis/Wash Buffer,轻柔混匀磁珠 5∽10min。收集磁珠,弃上清。再重复洗两次。
8. 变性洗脱:向离心管中加入 80∽100µL SDS-PAGESample Loading Buffer(1×),将样品置于 100℃水浴或者金属浴中加热 10min。通过磁力架分离磁珠,保留含有目的抗原的上清。
备注:如需保持蛋白活性,也可采用以下洗脱方式。
低 pH 洗脱:向离心管中加入 100µL Elution Buffer。保持混匀在室温下孵育离心管 5∽10min。通过磁力分离磁珠,保留含有目的抗原的上清。每 100µL 洗出液中加入20µL Neutralization Buffer 来中和低 pH。

1. 进行实验操作之前,请务必认真阅读本操作说明书。
2. 实验中 SA 与生物素化分子结合的能力是有区别的,结合还会受到 Buffer 的影响,因此可自行优化操作细节或者筛选及配制缓冲液进行实验。
3. 磁珠使用前应充分振荡均匀。磁珠应保存在储存溶液中,防止干燥。
4.我司生产的生化试剂如无特殊标注,基本为非无菌包装,若用于细胞实验,请提前做好预处理。需低温保存的产品,一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效。
5.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
6.为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
7.实验结果可由多种因素影响,相关处理只限于产品本身,不涉及其他赔偿。
备注:由于产品信息可能会有优化升级,请以实际收货标签信息为准。