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猪链球菌荧光定量PCR试剂盒(染料法)  Cite:0    分享
Streptococcus sui qPCR Kit(SYBR)

货号： F17373
复制产品信息
规格:
50T
单位:
盒
单价:￥6735.00
产品简介
产品组成
产品特点
使用方法(仅供参考)
储存与保存
注意事项
产品简介

猪链球菌病(Streptococcus suis)是一种人畜共患的急性、热性传染病，急性型常为出血性败血症和脑膜炎，慢性型以关节炎、心内膜炎、化脓性淋巴结炎为特征。猪链球菌呈圆形或卵圆形，常呈链状排列，长短不一，是革兰氏阳性球菌。在血平板培养基上生长，菌落周围形成溶血环。现已发现其荚膜抗原血清型有35种以上。但是，并非所有的血清型都有致病性。大多数致病性血清型在1-9血清型。血清型2为最常见和毒力最强的血清型。

产品组成
组分规格
2×qPCR MagicMix500μL
荧光PCR专用模板稀释液1mL
猪链球菌通用染料法qPCR引物混合液100μL
猪链球菌通用染料法qPCR阳性对照(1×108拷贝/μL)50μL


产品特点

1.即开即用，用户只需要提供病毒DNA模板。

2.引物根据猪链球菌通用专一区设计，特异性高。

3.荧光定量PCR检测，比常规PCR更加灵敏。

4.一管式闭管操作，降低了交叉污染。

5.本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。

使用方法(仅供参考)

一、稀释PCR阳性对照
(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)注意：由于阳性对照浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。

1.标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。

2.用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液(最好用带芯枪头，下同)。

3.在7号管中加入5μL 1×108拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×107拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。

4.换枪头，在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×106拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。

5.换枪头，在5号管中加入5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×105拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。

6.重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。


二、样品DNA的制备

7.如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL PCR阳性对照的10000倍稀释的(稀释后浓度为1×104拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝，可以将10μL原液加入到990μL自备TE溶液中，充分混匀，此为100倍稀释液。再取10μL此稀释液加入到990μL自备TE溶液中，充分混匀，此为10000倍稀释液)再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品DNA。

8.用自选方法纯化N+2个样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

三、设置qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)

9.如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做1次重复，则标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，1个用于PCR阳性对照(如用第4号阳性对照稀释液)。下面只描述定量分析的步骤，定性分析只是把6个标曲反应缩减成1个，其余不变。

10.在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加)：

成分样品管N+2个PCR阴性对照管PCR阳性对照管(2~7管)
2×qPCR MagicMix10μL10μL各10μL

猪链球菌通用染料法
qPCR引物混合液

2μL2μL各2μL
自备10×ROX(见注)2μL2μL各2μL
N+2待测样品cDNA模板6μL--
第7步所得PCR阳性对照稀释液(2～7号)--各6μL

注：仅ABI7500、7700和7900仪器需要使用ROX作为对照，其他荧光PCR仪器(如iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000和LightCycler480)不需要使用ROX，则用水替代。

11.盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR(具体PCR参数可以根据仪器不同而自行优化)。

过程温度时间
预变性95℃5min


PCR反应

(40个循环)		95℃15sec
60℃1min，(采集FAM通道的荧光信号)
按仪器预设程序进行熔解曲线分析


四、数据处理

12.如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品cDNA浓度的log值，再推算出其浓度。

13.如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35～40之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。


储存与保存

1.保存：-20℃
2.有效期：1年

注意事项

1.我司生产的生化试剂如无特殊标注，基本为非无菌包装，若用于细胞实验，请提前做好预处理。需低温保存的产品，一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。

2.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。 

3.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。 

4.实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。 

 

备注：由于产品信息可能会有优化升级，请以实际收货标签信息为准。

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