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基本信息-
产品名称siRNA/miRNA 体外转染试剂
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保存温度2-8℃
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有效期1年
产品简介siRNA/miRNA 体外转染试剂是一种新型高效阳离子聚合物，其可与RNA(包括siRNA、miRNA)相互作用形成复合物将 RNA 递送至真核细胞内，具有转染效率高，细胞毒性小，生物相容性好等特点，尤其适合各种高通量细胞筛选实验，方便、快捷、高效。
siRNA/miRNA体外转染试剂通过内吞作用进入细胞后，表达“质子海绵效应”的特性，缓冲内体 pH 值，保护RNA 不被降解，连续的质子内流也可引起溶酶体渗透肿胀和破裂，为 RNA 逃逸到细胞质提供了机制。
产品特点1.转染效率高
2.细胞类型广
3.细胞安全性高
产品组成| 组分 | 规格 | 保存温度 |
| siRNA/miRNA 体外转染试剂 | 0.8ml | 2-8℃ |
| 5%葡萄糖溶液 | 8ml | 2-8℃ |
操作步骤（仅供参考）1. 接种细胞：转染前 18~24 小时将细胞接种在孔板中，细胞密度以及培养液体积如表1 所示：
表 1.常用细胞培养装置中细胞接种量以及培养液体积推荐量
| 细胞培养装置 | 细胞接种数量 | 培养液体积 (mL) |
| 96 孔板 | (0.5-0.8)×104 | 0.2 |
| 24 孔板 | (2.5-3)×104 | 0.5 |
| 12 孔板 | (1-1.5)×105 | 1 |
| 6 孔板 | (3-3.5)×105 | 2 |
| 100 mm 培养皿 | (0.8-1)×106 | 10 |
2. 准备 RNA-转染试剂复合物：
（转染配方比例如表 2 和表 3 所示。表 2：以 RNA 的最终浓度 1 nM，RNA 分子量为 14 kDa 为例；表3：以1 nM，RNA分子量为 60 kDa 为例）。
1) 使用 W μL DEPC 无菌水配置的 5%葡萄糖溶液，将 X μg 的 RNA（DEPC 无菌水配置）稀释至所需终浓度。
注：根据细胞和目的基因的差异，RNA 所需终浓度可能在 1~50 nM 之间，常见参考剂量 20-30nM。更准确的数据可根据梯度实验测试，或查阅相关实验参考文献。
2) 立即再加入 Y μL 的siRNA/miRNA 体外转染试剂。注：RNA 与siRNA/miRNA 体外转 染试剂的推荐使用比例为质量体积比 1:2（w/v，1 μg RNA使用2μL siRNA/miRNA 体外转染试剂进行转染）。
3) 充分混匀后室温静置 20 分钟。
3. 细胞转染：
1) 在形成复合物过程中，将步骤 1 准备好的细胞的培养基替换为无血清、无双抗的培养液（也可采用含3%血清、无双抗的培养液），加入的培养液体积为 Z mL
2) 加入步骤 2 准备好的siRNA/miRNA 体外转染试剂与 RNA 复合物。
3) 37 ℃，5% CO2 培养箱培养。转染 24-48 小时后（中途无需换液，也可根据细胞种类于转染6小时后加入含血清培养基），采用适当的方法进行检测。
表 2.常用细胞培养装置中细胞转染时各组分使用剂量
| 细胞培养装置 | 培养液终体积(mL) | X ：加入RNA的量。RNA分子量14kD，终浓度1nM 为例 | Y (μL)：加入转染试剂的体积 | W (μL)：RNA- 转染试剂复合物总体积 | Z(mL)：加入的无血清培养基体积 |
| 96 孔板 | 0.2 | 2.8 ng (0.2 pmol) | 5.6×10-3 | 40 | 0.16 |
| 24 孔板 | 0.5 | 7.0 ng (0.5 pmol) | 1.4×10-2 | 100 | 0.4 |
| 12 孔板 | 1 | 14 ng (1 pmol) | 2.8×10-2 | 200 | 0.8 |
| 6 孔板 | 2 | 28 ng (2 pmol) | 5.6×10-2 | 200 | 1.8 |
| 100 mm 培养皿 | 10 | 140 ng (10 pmol) | 0.28 | 500 | 9.5 |
注：表中配比为 RNA 终浓度为 1nM 时，1 孔中细胞转染所需的量，使用时请依据不同 RNA 终浓度进行相应倍比调整
表 3.常用细胞培养装置中细胞转染时各组分使用剂量(大分子量 RNA)
| 细胞培养装置 | 培养液终体积(mL) | X ：加入RNA的量。RNA分子量60kD，终浓度1 nM 为例 | Y (μL)：加入转染试剂的体积 | W (μL)：RNA- 转染试剂复合物总体积 | Z(mL)：加入的无血清培养基体积 |
| 96 孔板 | 0.2 | 12 ng (0.2 pmol) | 2.4×10-2 | 40 | 0.16 |
| 24 孔板 | 0.5 | 30 ng (0.5 pmol) | 0.06 | 100 | 0.4 |
| 12 孔板 | 1 | 60 ng (1 pmol) | 0.12 | 200 | 0.8 |
| 6 孔板 | 2 | 120 ng (2 pmol) | 0.24 | 200 | 1.8 |
| 100 mm 培养皿 | 10 | 600 ng (10 pmol) | 1.2 | 500 | 9.5 |
注：表中配比为 RNA 终浓度为 1nM 时，1 孔中细胞转染所需的量，使用时请依据不同 RNA
操作流程简图
备注：
1. 以 6 孔板，每孔培养液终体积 2mL,RNA 终浓度 20nM，RNA 分子量 14kD，X:Y=1:2(w/v)为例。
2. 为保证 RNA 终浓度相对准确，若需加入的 RNA 或转染试剂体积较大，W 体积应为最终定容的总体积
注意事项1. 转染前细胞应处于对数生长期的良好状态，推荐细胞传代后 12-24 小时内转染，细胞密度控制在50%-70%。
2. 使用高纯度的 RNA 也是转染成功的关键因素，在转染前确定 RNA 的含量和纯度，实验过程中使用DEPC 处理过的耗材和试剂，避免 RNase 污染；另外 RNA 与转染试剂复合物制备时盐含量高会导致复合物形成时产生沉淀，因此应将 RNA 重悬于 5%葡萄糖溶液（由无菌DEPC 水配制）或DEPC水中，如下（4）中推荐的稀释液。
3. RNA 与转染试剂复合物应现配现用；配置后的 RNA 与转染试剂复合物应于1 小时内用于细胞转染。
4. 体外细胞转染时血清的影响：高浓度血清的存在会影响siRNA/miRNA体外转染试剂与RNA 形成复合物。因此推荐转染过程中使用无血清培养基，以达到复合物形成的最佳效果；如细胞对无血清条件完全不能耐受，则推荐转染过程使用不高于 3%含量的血清；复合物进入细胞后(约需4-6 小时)，血清的存在并不影响复合物的转染效果，因此转染 4-6 小时后可加入含血清培养基继续培养细胞。
5. 体外细胞转染推荐稀释液： 5%葡萄糖溶液（w/v，用无菌 DEPC 水配制）；siRNA/miRNA体外转染试剂试剂可用该稀释液稀释，稀释后的siRNA/miRNA 体外转染试剂试剂置于4℃或-20℃保存，两周内稳定。
6. 为了达到更好的转染效果，可根据实验需要优化 RNA 与siRNA/miRNA体外转染试剂的配比，推荐优化比例范围为 1:2~1:8（w/v, RNA: siRNA/miRNA 体外转染试剂）；
7. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
8. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
9. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
备注：由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。
