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基本信息-
产品名称脂质氧化(MDA)检测试剂盒
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保存温度-20℃ 避光
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有效期1年
产品简介脂质氧化(MDA)检测试剂盒采用一种基于丙二醛（Malondialdehyde，MDA）和硫代巴比妥酸（thiobarbituric acid，TBA）反应产生红色产物的显色反应，随后通过比色法用于对血浆、血清、尿液、动植物组织或细胞裂解液中 MDA 进行定量检测，广泛用于脂质氧化（lipidperoxidation）水平检测的试剂盒。
MDA 是一种生物体脂质氧化的天然产物。动物或植物细胞发生氧化应激（oxidative stress）时，会发生脂质氧化。一些脂肪酸氧化后逐渐分解为一系列复杂的化合物，其中包括MDA。此时通过检测 MDA 的水平即可检测脂质氧化的水平，因此 MDA 的测定被广泛用作脂质氧化的指标。生物体内的一些其它生化反应也会产生 MDA，例如血栓素合成酶（thromboxanesynthase）也可以催化产生，但只要在测定时设置适当对照即可观察到脂质氧化水平的变化。
丙二醛在较高温度及酸性环境中可与 TBA 发生反应，形成红色的MDA-TBA加合物，反应原理如下：
MDA-TBA 加合物在 535nm 处有最大吸收，据此可以通过比色法进行检测。另外，MDA-TBA 加合物也可以在 535nm 被激发产生最大发射波长 553nm，据此也可以进行荧光检测。
本试剂盒中采用了特殊的抗氧化剂，可以有效地抑制样品在检测过程中产生新的MDA，并且可以把部分 MDA 天然形成的聚丙二醛分解成 MDA 使检测更加准确。
本试剂盒可以检测低达 1μM 的 MDA，也可检测高达 200μM 的 MDA （参考图1）。血浆、血清样品中的 MDA 含量通常在约 2-4μM，尿液中的 MDA 含量通常在约5-30μM，在本试剂盒的检测范围内，可以直接用本试剂盒检测血浆、血清、尿液样品等。
图 1. 不同浓度标准品使用本试剂盒的检测效果图。实测数据会因检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
产品组成| 组分 | 100T | 500T |
| TBA | 25 mg | 125 mg |
| TBA 稀释液 | 15ml | 75 ml |
| 抗氧化剂 | 0.3 ml | 1.5 ml |
| 标准品(1mM) | 0.2 ml | 1 ml |
操作步骤（仅供参考）一 样品的准备
(a) 血浆、血清或尿液样品制备后可以直接用于 MDA 测定。
(b) 组织或细胞可以使用 PBS 或裂解液进行匀浆或裂解。对于组织，组织重量占匀浆液或裂解液的比例为 10%；对于细胞，每 1×106的细胞使用 0.1ml 裂解液或匀浆液。匀浆或裂解后，10,000g-12,000g 离心 10 分钟取上清用于后续测定。对于一些特殊样品，离心不能获得澄清的上清溶液的，可以使用 0.2μm 孔径的过滤器过滤以获得澄清的样品溶液。匀浆或裂解等样品制备步骤建议在冰浴或 4℃进行操作。样品准备完毕后建议用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的 MDA 含量。
(c) 本试剂盒对于样品中的常见化学成分的兼容性参考下表：
| 试剂类别 | 化学成分 | 试剂类别 | 化学成分 |
| 缓冲试剂 | Borate (≤50mM) | 抑制剂/螯合剂 | Antipain (≤100μg/ml) |
| HEPES (≤100mM) | Chymostatin (≤10μg/ml) | ||
| Phosphate (≤100mM) | Leupeptin (≤10μg/ml) | ||
| Tris (≤25mM) | PMSF (≤200μM) | ||
| 去垢剂 | CHAPS (≤1%) | Trypsin (≤10μg/ml) | |
| Triton X-100 (≤1%) | EDTA (≤1mM) | ||
| Tween 20 (≤1%) | EGTA(≤1mM) | ||
| 其它试剂 | Sucrose (250mM)(不建议使用) | ||
| Glycerol (≤10%) | |||
二 试剂盒的准备工作
(a) TBA 储存液的配制：称取适量 TBA，用冰乙酸（用户自备）配制成浓度为0.37%的TBA 储存液。例如 18.5mg TBA 用 5ml 冰乙酸配制，或者 25mg TBA 用6.76ml 冰乙酸配制，最终浓度即为 0.37%。TBA 储存液较难溶解，需加热到 70℃，并通过剧烈涡旋振荡以促进溶解。配制好的 TBA 储存液室温避光保存，至少 3 个月内有效。
(b) MDA 检测工作液的配制：根据待测定的样品数（含对照），参考下表在临检测前新鲜配制适量的 MDA 检测工作液。
| 检测样品数 | 1 | 10 | 20 | 50 |
| TBA稀释液 | 150μl | 1500μl | 3000μl | 7500μl |
| TBA储存液 | 50μl | 500μl | 1000μl | 2500μl |
| 抗氧化剂 | 3μl | 30μl | 60μl | 150μl |
注：MDA 检测工作液较难溶解，可以 70℃加热，并剧烈涡旋振荡以促进溶解。也可以通过超声处理以促进溶解。配制好的 MDA 检测工作液必须当天使用。
(c) 标准品的稀释：取适量标准品用蒸馏水稀释至 1、2、5、10、20、50μM，用于后续制作标准曲线。如果样品中 MDA 的浓度很高，可以增加 100、150 和 200μM的标准品浓度。
三 样品测定
(a) 在离心管或其它适当容器内加入 100μl 匀浆液、裂解液或 PBS 等适当溶液作为空白对照，加入 100μl 上述不同浓度标准品用于制作标准曲线，加入 100μl 样品用于测定；随后加入0.2ml MDA 检测工作液。可参考下表设置检测反应体系：
| 样品 | 标准品 | 空白对照 | |
| 待测样品 | 100μl | - | - |
| 标准品 | - | 100μl | - |
| MDA 检测工作液 | - | 200μl | 200μl |
| 匀浆液、裂解液或 PBS | - | - | 100μl |
(b) 混匀后，100℃或沸水浴加热 15 分钟。加热时务必注意避免液体暴沸溅出。如果使用加热块进行加热注意用重物压紧离心管盖；如果使用沸水浴，则需使用可把盖子锁死的离心管或螺旋盖离心管，或用封口膜封住离心管口，用针头刺一小孔。最方便和准确的加热方法是使用带有热盖并可以加热 0.5ml PCR 管的 PCR 仪。
(c) 水浴冷却至室温，1000g 室温离心 10 分钟。取 200μl 上清加入到96 孔板中，随后用酶标仪在 532nm 测定吸光度。如果不方便测定 532nm 的吸光度，也可以测定530-540nm之间的吸光度。可以设定 450nm 为参考波长进行双波长测定。
(d) MDA 含量的计算：对于血浆、血清或尿液等样品可以直接根据标准曲线计算获得MDA的摩尔浓度，对于细胞、或组织样品，计算出样品溶液中的 MDA 含量后，可以通过单位重量的蛋白含量或组织重量等来表示最初样品中的 MDA 含量，例如μmol/mg 蛋白或μmol/mg 组织。
注意事项1. 冰乙酸，即 TBA 配制液需用户自备。
2. 如果没有检测到 MDA，可能样品中 MDA 浓度过低，在检测组织或细胞的MDA时，请使用更多的组织或细胞，不要稀释样品。
3. 醛以及较高浓度的可溶性糖（例如 250mM 蔗糖/葡萄糖）对反应有干扰，可溶性糖与TBA 显色反应的产物在 532nm 也有吸收（最大吸收在 450nm）。如果可溶性糖对测定有干扰，可以通过测定 450nm 作为参考波长进行双波长测定，消除其干扰。
4. 我司生产的生化试剂如无特殊标注，基本为非无菌包装，若用于细胞实验，请提前做好预处理。需低温保存的产品，一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
5. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
6. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
7. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
备注：由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。
