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斑马鱼产品
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基本信息-
产品名称溶菌酶(LZM)检测盒(带标准)
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检测方法比浊法
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保存温度按试剂盒各组分温度保存
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有效期6个月
产品简介本所比浊法测定溶菌酶活性方法主要有三种：（注意本实验是测透光度值而非吸光值）
1. 自身对照法：适用于所有样本
2. 空白对照法：适用于无色澄清透明的样本
3. 标准曲线法：适用范围同空白对照法
测定原理在一定浓度的混浊菌液中，由于溶菌酶能水解细菌细胞壁上肽聚糖使细菌裂解而浓度降低，透光度增强，故可以根据透光度变化来推测溶菌酶的含量。
产品组成试剂组成
试剂一：菌粉，5mg×4 支，2～8℃干燥处保存。
试剂二：菌粉溶剂，100mL×1 瓶，2～8℃保存，并每月放微波炉中消毒 20 秒。
试剂三：标准品，粉剂 2mg×1 支（活力为 8 万单位/mg），2～8℃干燥处保存。
[注]：试剂盒严格按照上述方法保存有效期可延至一年。
试剂配制
1. 贮备菌液的配制：
取 5mg/支的菌粉 1 支，加菌粉溶剂 1mL，混匀后转移到匀浆管中，轻轻缓慢上下旋转研磨 3 分钟（切勿溅出），即为贮备菌液，将其取出后置 2～8℃冰箱密封可保存一周左右。
2. 应用菌液的配制：
按贮备菌液:菌粉溶剂=1:19 进行配制，需多少配多少,用时摇匀。
3. 标准品的配制：
①标准品贮备液的配制：每支准确加双蒸水 1.0mL 配成 2mg/mL 的标准品贮备液。2～8℃可保存 7～10 天。
②标准品应用液的配制：临用时按标准品贮备液∶双蒸水=1∶99 比例先稀释成 20µg/mL 的标准品应用液，再将 20µg/mL 标准液用双蒸水 8 倍(1:7)稀释，得到 2.5µg/mL（即200U/mL）的标准品应用液，需多少配多少。2～8℃可保存 7～10 天。
操作步骤（仅供参考）自备试剂仪器及耗材
含 530nm 波长的分光光度计及 1cm 光径比色皿、37℃水浴锅、台式低速离心机、各种规格移液器、玻璃匀浆器（研磨菌粉用，本公司有售）、双蒸水、生理盐水（0.9%）或 PBS（0.1M）、涡旋混匀器、试管或离心管、蛋白测定试剂。
自身对照法测定溶菌酶
注：本法用分光光度计测得值必须是透光度值。
1. 操作步骤
①将配制好的应用菌液放入 37℃水浴箱中预温 10 分钟以上，使菌液温度达到 37℃。标准液与样本同温。
②将可见分光光度计于 530nm 处,1cm 光径比色皿,以双蒸水调透光度 100% (比色皿准备两只,一只用于调透光度100%,另一只用于测定)。
③往相应编号的试管中加入 0.2mL 待测样本，取 2mL 应用菌液迅速冲入试管中，立即混匀并计时。(标准品应用液取 0.2mL,加入 2mL 应用菌液,其它操作与测定相同)
④迅速倒入比色皿中在可见分光光度计 530nm 处，15 秒时读取透光度值 T0, 比色皿不要取出，在 2 分 15 秒时读取透光度值 T2；
⑤求出 2 次透光度的差值（△T= T2-T0）
注：应用菌液使用时每隔一段时间最好混匀一下。
注：当测定管△T 大于 10 时，请将样本稀释后再测。
注：用同一比色皿每检测一个样本后均要用双蒸水冲洗干净，才可再放第二个样本或标准品应用液。
2. 计算公式
C标准：标准液浓度，2.5µg/mL 即 200U/mL 即 1µg = 80U
N：样本测试前稀释倍数
Cpr:匀浆液蛋白浓度,mgprot/mL(prot 指蛋白)
空白对照法测定溶菌酶
（适用于无色澄清透明的样本，如部分血清、尿液唾液等）
注：本法用分光光度计测得值必须是透光度值。
1. 操作表（操作最好在冰水浴中进行）：
注：冰水浴即自来水中加几块冰。
| 空白管 | 标准管 | 测定管 | |
| 双蒸水(ml) | 0.2 | ||
| 2.5µg/mL 标准应用液(ml) | 0.2 | ||
| 样本(ml) | 0.2 | ||
| 应用菌液(ml) | 2.0 | 2.0 | 2.0 |
| 混匀，37℃准确水浴 15 分钟，立即取出置于 0℃以下的冰水浴中 3 分钟，逐管取出倒入 1cm 光径比色皿中，530nm 处以双蒸水调透光度 100%，比色，测各管透光度 T15（T15 即 37℃水浴 15 分钟后的透光度值）。 | |||
注：读数时可能在比色皿表面有水雾形成，请将比色皿擦干净后再读。
注：测试过程中为消除每只测定管之相互间的干扰，所以必须在每支管子测定前将比色皿用双蒸水冲洗干净。
注：OT15 为水浴 15 分钟后的空白管透光度，UT15 为水浴15 分钟后测定管的透光度，ST15 为水浴 15 分钟后标准管的透光度。注：测定管 T15-空白管 T15 大于 15 时，请将样本稀释后再测。
2. 计算公式
C 标准：标准液浓度，2.5µg/mL 即 200U/mL 即 1µg = 80U
N：样本测试前稀释倍数
注意事项：
1. 菌粉尽量研磨细质均匀，研磨时防止菌液溅出。
2. 菌液、标准品、样本必须先在 0℃冰水浴中预冷 5 分钟以上。37℃水浴前的操作最好在冰水浴中进行。
3. 为了避免检测误差，空白管单独用一个比色皿比色，每次加样前或比色之前比色杯要先用自来水冲洗干净，再用双蒸水冲洗 2～3 遍。
4. 比色时各管从冰水中逐个取出比色。比色皿过冷会在皿壁上形成水雾，所以要擦干再比色。
5. 试管要用同一批次。
6. 为了减少误差 1cm 光径的比色皿也要进行校正。
7. 比色与计时要同步，准确控制时间。最好为二个人或者用自动生化分析仪。
8. 自身对照法测定时，假如样本△T 值较小（小于 0.5），则可将反应时间延长（如 5 分钟或 10 分钟），但延长时间检测时标准液需稀释一定的倍数（与时间延长的倍数一致）才行。
标准曲线法测定溶菌酶
1. 标准曲线的制备：
①标准液的稀释：
将标准品一支准确加双蒸水 1.0 mL，混匀，配成160000 U/mL 的标准品贮备液，再用双蒸水分别稀释成2000 U/mL、1000 U/mL、500 U/mL、250 U/mL、125U/mL、62.5 U/mL、31.25 U/mL、15.625 U/mL 的不同浓度的标准液。
②将各种浓度的溶菌酶标准液置于样本所在的温度条件下5 分钟以上，应用菌液在 37℃预温 10 分钟以上。
③按下表进行操作：（操作最好在冰水浴中进行）
| 空白管 | 标准管 | |
| 双蒸水(ml) | 0.2 | |
| 不同浓度标准液(ml) | 0.2 | |
| 应用菌液(ml) | 2.0 | 2.0 |
| 37℃准确水浴 15 分钟，立即取出置于 0℃以下的冰水浴中 3分钟，逐管取出，倒入 1cm 光径比色皿中，530nm 处，双蒸水调透光度 100%，比色，测各管透光度 T15（T15 即 37℃水浴 15 分钟后的透光度值） | ||
④作坐标图：
以各标准管的单位浓度为横坐标，以各管透光度差值为纵坐标作图。
2、样本按空白对照法测定溶菌酶操作表进行测定然后查标准曲线（但不如计算公式方便）
注：因试剂盒内带有标准品，每次只需做 1～2 只标准管即可以，一般不需要作标准曲线。
注意事项1. 我司生产的生化试剂如无特殊标注，基本为非无菌包装，若用于细胞实验，请提前做好预处理。需低温保存的产品，一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
2. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
3. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
4. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
备注：由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。
