咨询热线

13564444959

当前位置:首页 > 产品中心 > 生化试剂盒
产品中心
订货方式
订货电话:13564444959
订货时间:周一至周五
订货Q Q:79688691
订货邮件:79688691@qq.com
总一氧化氮合成酶(NOS)测试盒(比色法)  Cite:0    分享

货号: F14640
复制产品信息
规格:
25管/24样 50管/48样
单位:
单价:¥500.00
基本信息
产品简介
产品组成
操作步骤(仅供参考)
注意事项
基本信息
  • 产品名称
    总一氧化氮合成酶(NOS)测试盒
  • 检测方法
    比色法
  • 保存温度
    按试剂盒各组分温度保存
  • 有效期
    6个月
产品简介

检测前请仔细阅读说明书,预试后再进行批量实验
检测原理:NOS 催化 L-Arg 和分子氧反应生成 NO,NO 与亲核性物质生成有色化合物,在 530nm 波长下测定吸光度,根据吸光度的大小可计算出 NOS 活力。

产品组成
试 剂 组分25 管/24 样50 管/48 样保存温度
试剂一 底物缓冲液 6mL×1 瓶 6mL×2 瓶 --20℃ 避光
试剂二促进剂粉剂×2 支 粉剂×3 支-20℃
稀释液0.6 mL×2 支稀释液0.6 mL×3 支-20℃
(粉剂量较少,可能附着于管壁或盖子上,并非空管,如使用时肉眼不可见,可将其 4000 转/分钟离心 2 分钟后使用),测试前取稀释液一支 0.6mL 加入一支粉剂中充分混匀(即将 1.5mL 小离心管反复颠倒,并将小离心管尖部的液体弹下来),测试后剩余试剂可放入-20ºC 以下冷冻保存,时间不超过一周。若发现粉剂变成黄褐色或咖啡色,则不可以再用。
试剂三 显色剂3mL×1 瓶6mL×1 瓶2-8℃ 避光
试剂四透明剂3mL×1 瓶6mL×1 瓶 室温
天冷后会凝固,37℃水浴变澄清时再使用
试剂五 终止剂60mL×1 瓶 60mL×2 瓶2-8℃
从冰箱取出时可能会出现浑浊,37℃加热至透明再用


操作步骤(仅供参考)

自备试剂
含 530nm 波长的分光光度计及 1cm 光径比色皿、37℃恒温水浴锅或气浴箱、台式低速离心机、各种规格移液器、双蒸水、生理盐水(0.9%)或 PBS(0.1M)、涡旋混匀器、离心管、蛋白测定试剂(组织及细胞样本用)
操作步骤(仅供参考)
试剂从冰箱取出,室温稳定30分钟再用,试剂四和试剂五必须澄清透亮,再进行操作,否则会影响结果


空白管总 NOS 测定管
双蒸水(μL) a*
样本(μL) 
a*
试剂一底物缓冲液(μL)200 200 
试剂二 促进剂(μL)10 10 
试剂三 显色剂(μL)100100
混匀,37ºC 水浴准确反应 15 分钟
试剂四 透明剂(μL) 100100
试剂五 终止液(μL) 2000 2000 
混匀,波长 530nm,1cm 光径,双蒸水调零,分光光度计测定各管吸光度值

注意:
1. a*为参考取样量及补足双蒸水的量,10%的大鼠肝组织 50~100μL,鼠血清 30μL,10%的大鼠肾匀浆50μL,狗血清 30μL,心肌培养液 100μL。
2. 比色时注意管内有无结晶或混浊,若有结晶或混浊可放 37℃水浴锅内轻轻搅动几下,混浊或结晶消失后再比色。
计算
(一)血清 T-NOS 酶活力计算
1. 样本前处理:直接使用。
2. 单位定义:每毫升血清每分钟催化生成 1nmol NO 为一个酶活力单位。
3. 计算公式:
ed_1763291036902720.png
V反总: 反应液总体积,(a+2.41)mL;
V: 取样量,(a)mL;
d: 比色光径,cm;
T: 反应时间,15min;
ε: 呈色物消光摩尔系数,38.3×10-6
(二)组织 T-NOS 酶活力计算
1. 样本前处理:准确称取待测组织的重量,按重量(g):体积(mL)=1:9 的比例加入 9 倍体积的匀浆介质(推荐0.9%的生理盐水或 0.1mol/L 且 pH 值为 7.0-7.4 的磷酸盐缓冲液),冰水浴条件机械匀浆,4000 转/分,离心10 分钟,取上清液(10%匀浆上清)待测。(注:匀浆上清需同步测定其蛋白浓度,蛋白测定试剂盒本所有售)
2. 单位定义:每毫克组织蛋白每分钟催化生成 1nmol NO为一个酶活力单位。
3. 计算公式:
ed_1763291191893039.png
V反总: 反应液总体积,(a+2.41)mL;
V: 取样量,(a)mL;d:比色光径,cm;
T: 反应时间,15min;
ε: 呈色物消光摩尔系数,38.3×10-6
Cpr:组织匀浆蛋白浓度,mgprot/L(prot 指蛋白)
参考值
大鼠血清:18.69±3.97 U/mL(n=45)
10%大鼠肾匀浆:0.536±0.134 U/mgprot(n=19)
狗血清:20.57±3.39 U/mL(n=18)
心肌培养液:0.698±0.110U/mL(n=12)

注意事项

1. 促进剂最好现用现配,配好后尽量一日内用完,如有剩余则-20ºC以下保存不超过一周;未配制之前的 2 号促进剂和稀释液均应-20ºC 以下保存,如淡黄色或白色粉末变成咖啡色或黄褐色颗粒则失效不可用。
2. NOS 活性低,稳定性差,样品或匀浆上清如不马上检测,应置-20ºC 以下冷冻保存。
3. 试剂一与配制好的试剂二应避免反复冻融。
4. 室温低时,试剂五会出现浑浊,如果已经在测试管中加入了 NOS 5 号,可将测试管对着灯光,观察有无结晶或浑浊。如果有结晶或浑浊,请将每只测试管 37ºC 水浴锅中晃动 5 分钟,再比色。

5. 检测范围:0.2-81.9U/mL。

6. 我司生产的生化试剂如无特殊标注,基本为非无菌包装,若用于细胞实验,请提前做好预处理。需低温保存的产品,一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效。
7. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

8. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

9. 实验结果可由多种因素影响,相关处理只限于产品本身,不涉及其他赔偿。

 

备注:由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。

产品推荐
<