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斑马鱼产品
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基本信息-
产品名称辅酶Ⅱ(NADP+/NADPH)含量测试盒
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检测方法比色法
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保存温度按试剂盒各组分温度保存
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有效期6个月
产品简介正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：辅酶ⅡNADP(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，NADP+和NADPH 含量测定可以计算NADP（NADPH + NADP+)含量和NADPH/NADP+比值，其变化与磷酸戊糖途径和生物合成以及抗氧化反应密切相关。NADPH/NADP+比值不仅是细胞氧化还原态的主要标志之一，而且在PPP 途径、生物合成和抗氧化代谢中具有重要调控作用。
测定原理：分别用酸性和碱性提取液提取样品中NADP+和NADPH。NADPH通过PMS的递氢作用，使氧化型噻唑蓝（MTT）还原为甲瓒，570nm下检测吸光值，从而测定NADPH含量。利用6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原NADP+为NADPH，从而检测NADP+含量。
产品组成酸性提取液：50mL×1 瓶，4℃保存；
碱性提取液：50mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体15 mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 支，-20 ℃保存，用时加入4mL 蒸馏水，混匀；用不完的试剂4℃保存一周；
试剂三：粉剂×1 支，-20℃保存，用时加入4mL 蒸馏水，混匀；用不完的试剂4℃保存一周；
试剂四：粉剂×1 支，4 ℃保存，用时加入4mL 蒸馏水，混匀；用不完的试剂4℃保存一周；
试剂五：液体1.8mL×1 支，4 ℃保存；
试剂六：液体30mL×1 瓶，4 ℃保存；
试剂七：液体50mL×1 瓶，4 ℃保存。
操作步骤（仅供参考）自备材料
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水
操作步骤（仅供参考）
(假如 NADP+和 NADPH 均要测定,则可测样本数减为12)
（一）NADP+和NADPH 的提取
1. 血清（浆）中NADP+和NADPH 的提取：
NADP+的提取：按照血清（浆）体积（mL）：酸性提取液体积（mL）为1：5～10 的比例（建议取约0.1mL血清（浆），加入1mL酸性提取液），煮沸5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取上清液至另一新的离心管中，加入等体积的碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。
NADPH 的提取：按照血清（浆）体积（mL）：碱性提取液体积（mL）为1：5～10 的比例（建议取约0.1mL血清（浆），加入1mL 碱性提取液），煮沸5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取上清液至另一新的离心管中，加入等体积的酸性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2. 组织中NADP+和NADPH 的提取：
NADP+的提取：按照组织质量（g）：酸性提取液体积（mL）为1：5～10 的比例（建议取约0.1g组织，加入1mL 酸性提取液），冰浴研磨，煮沸5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取上清液至另一新的离心管中，加入等体积的碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。
NADPH 的提取：按照组织质量（g）：碱性提取液体积（mL）为1：5～10 的比例（建议取约0.1g 组织，加入1mL 碱性提取液），冰浴研磨，煮沸5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取上清液至另一新的离心管中，加入等体积的酸性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3. 细胞或细菌中NADP+和NADPH 的提取：
NADP+的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（104 个）：酸性提取液体积（mL）为500～1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 酸性提取液），超声波破碎1min（冰浴，强度20％或200W，超声2s，停1s），煮沸5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取上清液至另一新的离心管中，加入等体积的碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。
NADPH 的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（104 个）：碱性提取液体积（mL）为500～1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 碱性提取液），超声波破碎1min（冰浴，强度20％或200W，超声2s，停1s），煮沸5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取上清液至另一新的离心管中，加入等体积的酸性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。
（二）测定步骤： (在1.5mL 棕色EP管中按下表依次加样，反应过程需要避光）：
| 试剂名称(μL) | 对照管 | 测定管 |
| 样本 | 50 | 50 |
| 试剂一 | 250 | 250 |
| 试剂二 | 75 | 75 |
| 试剂三 | 75 | 75 |
| 试剂四 | 75 | 75 |
| 试剂五 | 35 | 35 |
| 试剂六 | 500 | 混匀，室温避光静置20min |
| 试剂六 | 500 | |
| 充分混匀，静置5min后，20000g，25℃离心5min，弃上清，沉淀中加入试剂七 | ||
| 试剂七 | 1000 | 1000 |
| 混匀，波长570nm，光径1cm，双蒸水调零测定对照吸光值A1和测定管吸光值A2，计算△A=A2-A1 | ||
注：对照管试剂五加完后必须马上加入试剂六，而测定管加完试剂五之后必须反应20min后再加试剂六。
计算公式
（一）NADP+含量的计算:
1. 血清（浆）中NADP+含量计算:
2. 组织、细菌或细胞中NADP+含量计算
(1)按样本蛋白浓度计算
(2)按样本鲜重计算
(3)按细菌或细胞密度计算
（二）NADPH 含量的计算
1. 血清（浆）中NADPH 含量计算
2. 组织、细菌或细胞中NADPH 含量计算
(1)按样本蛋白浓度计算
(2)按样本鲜重计算
(3)按细菌或细胞密度计算
V1：加入反应体系中样本体积，0.05mL；
V2：加入提取液体积，2mL；
V3：加入血清（浆）体积：0.1mL；
Cpr：样本蛋白质浓度，mgprot/mL(prot指蛋白)；
W：样本质量，g；
500：细胞或细菌总数，500 万。
注意事项1. 如果一次性测定样本数较多，可将试剂一、二、三、四按比例配制成混合液，现用现配。
2. 反应过程中注意避光。
3. 由于每个管需要设定一个对照管，本试剂盒50管可测24份NADP+或NADPH，二者都测则可测12份。
4. 最低检测限为1nmol/mL或1nmol/g组织鲜重或者0.01nmol/mgprot。
5. 我司生产的生化试剂如无特殊标注，基本为非无菌包装，若用于细胞实验，请提前做好预处理。需低温保存的产品，一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
6. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
7. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
8. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
备注：由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。
