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Follzol LS 液体总RNA提取试剂(同Trizol LS)  Cite:529    分享 一键复制产品信息

货号: F15003
规格:
100ML 5x100ML
单位:
单价:¥799.00
基本信息
产品简介
操作步骤(仅供参考)
注意事项
基本信息
  • 中文名称
    Follzol LS 液体总RNA提取试剂
  • 保存温度
    2-8℃
  • 有效期
    1年
产品简介

1. Follzol LS试剂是直接从来源于人,动植物,酵母,细菌和病毒的液体样品中提取总RNA的试剂。也可以从动物组织、 植物材料、 各种微生物及培养细胞等样品中提取总RNA。 该方法对少量的组织(50-100mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。样品在Follzol LS中被充分裂解的同时能够最大限度地保证RNA的完整性。在加入氯仿离心后,溶液会分成三层:上层无色水相、中间层和下层有机相,RNA分布在上清层中。收集上清层后,经异丙醇沉淀便可以回收得到总RNA。提取的总RNA完整性好,无蛋白和DNA污染,可用于各种分子生物学常规实验,如RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern blot、Dot Blot、体外翻译等。
2. Follzol LS试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如,从大鼠肝脏抽提的RNA琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色,可见许多介于7kb和15kb之间不连续的高分子量条带(mRNA和hnRNA成分),两条优势核糖体~5 kb(28S)和~2 kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3 kb之间 (tRNA, 5S)。当抽提的RNA用TE稀释时其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通琼脂糖凝胶电泳,28S的位置大约在2kb,18S大约在1kb的位置,不同浓度的凝胶位置变化较大。

操作步骤(仅供参考)

RNA抽提操作步骤:(实验前请先阅读注意事项
提示:用Follzol LS抽提RNA时要戴手套和护眼罩。避免接触皮肤和衣服。在化学通风橱完成操作。避免呼吸道吸入。如无特殊说明,所有的操作应该在 15~30°C 的室温条件下。
1.匀浆
a. 生物液体:每0.25ml液体样品(血清,血浆,脑脊液等等)加入0.75ml Follzol LS,用加样枪吹打液体样品几次以帮助裂解样品中细胞。每5~10×106个细胞至少加入0.75ml Follzol LS。Follzol LS和液体样品的终体积比总是3:1。
b. 动物组织:用glass或强力匀浆器搅匀组织样品,每50~100mg组织或者0.25ml组织悬液加0.75ml的Follzol LS。一般50~100mg组织体积都要小于0.25ml,如果组织样品的体积小于0.25ml,加入灭菌水将组织样品体积调整到0.25ml以保证体积比例是3:1。
c. 单层生长细胞:直接往直径3.5 cm的培养板中加入0.3ml-0.4ml的Follzol LS裂解细胞,用加样枪吹打帮助充分裂解细胞。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的Follzol LS量(每10cm2加0.3-0.4ml)。不需要往裂解物里面加水,因为培养板中附着残留的培养液已经充分稀释Follzol LS。
注意:贴壁培养细胞往往不能完全从培养瓶(皿)脱落,这并不意味着裂解不完全,此时细胞膜实际已经完全破裂开,并已释放出RNA,继续做即可。
d. 细胞悬液:通过离心来沉淀细胞。在Follzol LS试剂中用移液管反复吹打来裂解细胞。每5~10×106的动物细胞,植物或酵母菌细胞或每1×107细菌加0.75ml的Follzol LS。和步骤b一样用灭菌水调节样品体积到0.25毫升。在加入Follzol LS前应避免洗涤细胞,因为那样会增加mRNA降解的可能性。破裂某些酵母菌和细菌可能需要使用匀浆器。
e. 植物组织:取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织剪碎后直接在Follzol LS中迅速研磨,每50-100mg组织加入0.75ml Follzol LS,和步骤b一样用灭菌水调节样品体积到0.25毫升,混匀。
2. 将匀浆样品剧烈震荡后在室温条件下放置 5 分钟以使核蛋白体完全解离。
3. 可选步骤: 在4°C的条件下以12,000 rpm的离心力离心10分钟,取上清。
如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或肌肉,植物的块茎结节等可离心去除。离心后的沉淀中包含有细胞外膜,多糖,以及高分子量DNA,上清中含有 RNA。处理脂肪组织的样品时,上层是大量油脂应除去。取澄清的匀浆液进行下一步。
4. 每0.75ml Follzol LS加0.2ml氯仿。盖紧管盖,剧烈震荡15秒并将其在室温下放置2~3分钟。
5. 在4°C 12,000 rpm的离心力高速冷冻离心10-15分钟。离心后混合物分成三层:下层有机苯酚氯仿层,中间层,上层无色的水样层。RNA无一例外地存在于水样层当中。水样层的容量大约为所加Follzol LS容量的70%。(有机层和中间层是蛋白和DNA,如果需要提取,请联系我们索取提取方法)。
6. 将水样层转移到一干净的离心管中,加入等体积异丙醇。 颠倒混匀后室温放置10分钟。
RNA沉淀在离心前通常不可见,离心后在管侧和管底形成胶状沉淀。
7. 在室温或者4°C 12,000 rpm离心10分钟,弃上清。
8. 加入75%乙醇洗涤沉淀。每使用0.75ml Follzol LS用1ml 75%乙醇对沉淀进行洗涤。
9. 在室温或者4°C 12,000 rpm离心3分钟,弃上清,注意不要丢失RNA沉淀。
注意:剩余的少量液体可短暂离心,然后用枪头吸出,注意不要吸弃沉淀。
10. 室温放置2-3分钟,晾干。加入30-100μl RNase free水,充分溶解RNA,得到的RNA保存在-70℃,防止降解。
注意:沉淀不要过分干燥,以免难于溶解。

注意事项

1. 本品中含有苯酚,具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会导致中毒、灼伤以及其他身体伤害。使用本制品时应穿戴防护物品,如防护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触,应立即用大量的水冲洗并前往医院治疗。
2. 样品用Follzol LS匀浆后,如果不即刻加入氯仿之前,置于-70°C下可放置一个月以上。保存在75%乙醇中的RNA沉淀,2-8°C可以保存一周,-20°C条件下可以保存1年。RNA半衰期比较短,容易降解,建议提取后尽快进行后续实验,如反转录成cDNA,Northern Blot等。
3. 若下游实验对DNA非常敏感,建议用RNase free DNase I对RNA进行处理。
4. 自备试剂:氯仿、异丙醇(新开封或提取RNA专用)、75%乙醇(用 DEPC处理过的水配制)、RNase free water或者DEPC处理过的水。
5. 本公司生产Follzol LS质量优异,可以完美替代Invitrogen的Trizol Reagent LS。提取质量和下游实验完全一样。
6. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。 

7. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。 

8. 实验结果可由多种因素影响,相关处理只限于产品本身,不涉及其他赔偿。 


备注:由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。

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