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基本信息-
中文名称His标签蛋白琼脂糖磁珠(IDA-Ni)
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基质高度交联的 4%磁性琼脂糖磁珠
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载量>20mg 6xHis 蛋白
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配体亚氨基二乙酸（IDA）
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螯合金属离子Ni2+
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粒径30∽100μm
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耐压流速80∽150cm/h（0.3MPa，3bar）
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磁珠浓度磁珠体积占悬浮液体积的 50%
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储存缓冲液含 20%乙醇的 1xPBS
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保存温度2-8℃
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有效期2年
产品简介His 标签蛋白琼脂糖磁珠（IDA-Ni）是专为高效、快速纯化 His 标签蛋白而设计的新型磁性微球产品，可以在磁场作用下直接从生物样品中一步纯化出高纯度的目标蛋白，极大的简化了纯化工艺和提高纯化效率，适合科研和工业客户高通量地进行 His 标签蛋白的纯化。
与传统的柱层析方法相比，使用 His 标签蛋白琼脂糖磁珠无需控制上样流速，更不需要昂贵的层析设备和离心设备，样品与磁珠的结合以及目的蛋白与磁珠的分离变的非常简单、快捷，而且更容易实现高通量、自动化的蛋白纯化方法。
His 标签蛋白琼脂糖磁珠（IDA-Ni）可以用于各种表达来源（如大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞）的组氨酸标签（6xHis-tag）蛋白的纯化。它是由高度交联的 4%琼脂糖磁珠为基质，通过化学方法偶联了三配位的亚氨基二乙酸（IDA），螯合镍离子（Ni2+）后，可以形成比较稳定的平面四边形结构，从而有更多的位点与组氨酸标签上的咪唑环继续配位，达到结合目的蛋白的效果。
操作步骤（仅供参考）1. 准备 buffer
结合/平衡缓冲液、洗涤缓冲液和洗脱缓冲液等缓冲液请自行准备或购买我司 His 标签蛋白纯化试剂盒。
2. 样品准备
以大肠杆菌表达系统，500mL 诱导菌液为例。
1) 4℃离心 30min（4000xg）收集菌体，弃上清。
2) 用预冷结合/平衡缓冲液重悬菌体，如果需要，可加入适量的抑制剂，如蛋白酶抑制剂（PMSF）或其他蛋白酶抑制剂等。
注意：加入的抑制剂不能对 His 标签蛋白琼脂糖磁珠(IDA-Ni)的性能有影响，破碎液中不能含有 EDTA、EGTA等螯合剂，DTT、巯基乙醇等还原剂，尿素、盐酸胍等变性剂。
3) 用超声波破碎法在冰上破碎菌体，直到样品破碎完全。
可选：如果裂解物太粘稠，可以加入 RNase A（终浓度10μg/mL）和 DNase I（终浓度 5μg/mL）并在冰上孵育 10∽15min。
4) 4℃离心 20min（12,000xg），分离上清和沉淀，并过滤除杂。将上清和沉淀留样以备后续检测。
2. 纯化重组 His 标签融合蛋白
1) 将 His 标签蛋白琼脂糖磁珠(IDA-Ni)充分混匀，取2mL 磁珠悬浮液，置于 50mL 离心管中，再加入 10mL结合/平衡缓冲液，充分混匀后，磁性分离，弃上清，重复上述步骤 1 次。
2) 将制备好的含有 His 标签的融合蛋白上清加入到处理好的磁珠中，混匀后将离心管置于混匀仪上，室温孵育 1∽2h。(也可置于 2∽8℃孵育 2∽4h 或者过夜）
3) 孵育结束后，将离心管置于磁力架上，磁性分离，吸取上清，作为流穿，置于 2∽8℃，以备后续检测。向离心管中加入 15mL 洗涤缓冲液，置于混匀仪混匀 10∽15min，然后磁性分离，吸取上清（保留，以备取样检测）。重复上述步骤 3 次。
4) 常规洗脱：加入 1mL 洗脱缓冲液，吹打混匀 10∽20次后，通过磁力架分离上清至 1.5mL 的 Ep 管收集，重复操作，分别收集 5∽10 管洗脱液。备注:如需优化洗脱步骤，也可采用梯度洗脱方式。梯度洗脱：采用不同浓度咪唑分别进行洗脱，并收集洗脱液。
5) SDS-PAGE 检测将得到的样品（包括流穿、洗涤液和洗脱液）以及原始样品使用 SDS-PAGE 检测纯化效果。加入适量蛋白快速染色液浸没 PAGE 胶，然后置于摇床上摇动，染色 10∽30min 即可观测结果。
注：目的蛋白保存前应透析或者超滤以去除咪唑等杂质。再分装冻存到-80℃。
（可选）磁珠再生及储存
磁珠再生步骤请参考或直接购买我司 His 标签蛋白纯化再生试剂盒。
磁珠再生后，可以立即使用，如不立即使用需加入等体积 20%乙醇，置于 2∽8°C 保存。
注意事项1. 进行实验操作之前，请务必认真阅读本操作说明书。
2. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
3. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
4. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
备注：由于产品信息可能会有优化升级，请以实际收货标签信息为准。
