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斑马鱼产品
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基本信息-
产品名称AO/EB双荧光染色试剂盒
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保存温度2-8℃ 避光
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有效期1年
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应用检测细胞凋亡
产品简介细胞凋亡(Apoptosis)的检测方法有形态学、生物化学、DNA 片段化检测方法以及TUNEL 等标记片段化 DNA 方法,但从细胞凋亡概念产生的历史及准确性方面考虑,使用显微镜进行的形态学观察也是很重要的;细胞死亡的检测可以通过荧光色素染色区分活细胞、死细胞,测定细胞代谢活性和形态学观察,这些方法都是利用细胞凋亡这种情况进行测定的,因而不一定反映实际情况。
吖啶橙(Acridine Orange,AO)属于三环杂芳香染料,能透过胞膜完整的细胞,嵌入细胞核 DNA,与双链 DNA 结合后发出绿色荧光,荧光发射峰为 530nm;溴化乙锭(EthidiumBromide,EB)仅能透过胞膜受损的细胞,嵌入核 DNA 发出橘红色荧光,荧光发射峰为610nm。染色后,凋亡细胞呈染色增强,荧光更为明亮,均匀一致的圆状或固缩状、团块状结构;非凋亡细胞核呈荧光深浅不一的结构样特征;二者很容易判别。在荧光显微镜下观察,可见四种细胞形态:活细胞(VN),核染色质着绿色并呈正常结构;早期凋亡细胞(VA),核染色质着绿色呈固缩状或圆珠状;晚期凋亡细胞(NVA),核染色质为橘红色并呈固缩状或圆珠状;非凋亡的死亡细胞(NVN),核染色质着橘红色并呈正常结构。
产品组成| 组分 | 100T | 保存温度 |
| 试剂(A): AO Solution | 200μl | 2-8℃ 避光 |
| 试剂(B): EB Solution | 200μl | 2-8℃ 避光 |
| 试剂(C): AO/EB Dilution Buffer | 50ml | 2-8℃ |
操作步骤(仅供参考)自备材料
1. 荧光显微镜、低速离心机、细胞计数板、载玻片、盖玻片
2. PBS
操作步骤(仅供参考)
1. 收集细胞,用 PBS 清洗细胞 1 次,加入适量的 PBS 重悬细胞,计数并调节细胞浓度至(0.2~5)×106/ml。
2. 配制 AO/EB 工作液:取适量的试剂(A)、试剂(B)、试剂(C),按照试剂(A):试剂(B):试剂(C)=1:1:8 的比例稀配制成 AO/EB 工作液。
3. 每 25~50μl 细胞悬液中加入 AO/EB 工作液 2μl,混合均匀,室温孵育5~15min。
4. 取洁净载玻片,滴加上 5~10μl 细胞悬液,轻轻盖上盖玻片。
6. 在荧光显微镜下进行观察。
染色结果
1. 活细胞:绿色荧光
2. 死细胞:橙色荧光
注意事项1. 用能通过活细胞膜与 DNA 结合后发蓝色荧光的 Hoechst33342 和只能通过死细胞与DNA 结合后发红色荧光的 Propidium Iodide 对细胞进行双染的方法也比较常用。
2. 如有低温离心机进行离心效果更佳。
3. 操作过程中应注意减少试剂(A)、试剂(B)暴露于强光下的时间。
4. EB Solution 有一定毒性,请小心操作。
5. 试剂开封后请尽快使用,以防影响后续实验效果。
6. 我司生产的生化试剂如无特殊标注,基本为非无菌包装,若用于细胞实验,请提前做好预处理。需低温保存的产品,一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效。
7. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
8. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
9. 实验结果可由多种因素影响,相关处理只限于产品本身,不涉及其他赔偿。
备注:由于产品信息可能会有优化升级。请以实际收货标签信息为准。



