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基本信息-
产品名称Hoechst 33342/PI细胞凋亡染色试剂盒
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保存温度-20℃ 避光
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有效期1年
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应用流式细胞术检测细胞凋亡与细胞坏死
产品简介Hoechst33342/PI 细胞凋亡染色试剂盒(Hoechst 33342/PI Apoptotis Assay Kit)是一种采用 Hoechst33342 和碘化丙啶(Propidium Iodide，PI)双荧光染色方法进行细胞周期与细胞坏死分析的检测试剂盒。单纯的 PI 染色能够观察 DNA 直方图上凋亡细胞的亚G1峰，但只能代表 G0/G1 期发生凋亡，无法观察 S 期和 G2 期发生的细胞凋亡，而且细胞经过固定后无法对活细胞和死细胞进行区分。Hoechst33342 可以穿透细胞膜，进入正常细胞和凋亡细胞与 DNA 结合，能在紫外线下显示蓝色荧光，而且染色后凋亡细胞荧光会比正常细胞明显增强；PI 不能穿透细胞膜，对于具有完整细胞膜的正常细胞或凋亡细胞不能染色；而对于坏死细胞，其细胞膜的完整性丧失，PI 可以穿透细胞膜使坏死细胞着色产生红色荧光。
本品Hoechst 33342/PI 双染后可在流式细胞仪上将正常细胞、凋亡细胞和坏死细胞区别开来，在二元直方图上正常细胞对 Hoechst33342 具有拒染性，呈弱蓝色荧光＋弱红色荧光(Hoechst33342+/PI+)；凋亡细胞对 Hoechst33342 具有嗜染性，呈强蓝色荧光+弱红色荧光(Hoechst33342++/PI+)；坏死细胞对 PI 具有嗜染性，呈弱蓝色荧光＋强红色荧光；该试剂盒亦可用荧光显微镜进行观察，检测细胞含量范围一般为0.1～1×106之间。
产品组成| 组分 | 规格 | 保存温度 |
| 试剂(A): Cell Stain Buffer(2×) | 100ml | 室温 |
| 试剂(B): Hoechst33342 Stain | 0.5ml | -20℃ 避光 |
| 试剂(C): PI Stain | 0.5ml | -20℃ 避光 |
操作步骤（仅供参考）自备材料
1. 胰蛋白酶消化液、PBS
2. 流式细胞仪或荧光显微镜、细胞计数板
操作步骤(仅供参考)
1. 细胞样品的制备：
⑴贴壁细胞：
①小心收集细胞培养液到一个无菌离心管内备用。
②用胰蛋白酶消化细胞至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。
③收集上述细胞悬液到离心管内，4℃ 1000g 离心 3～5min，使细胞沉到管底，小心吸取上清并丢弃，可留大约 50μl 培养液，以免吸走细胞。
④加入约 1ml 提前预冷的 PBS，重悬细胞，并转移至 1.5ml 无菌离心管，4℃1000g离心3～5min，使细胞沉到管底。
⑤小心吸取上清并丢弃，可留大约 50μl PBS，以免吸走细胞，轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。
⑵悬浮细胞：
①4℃ 1000g 离心 3～5min，使细胞沉到管底，小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl 培养液，以免吸走细胞。
②加入约 1ml 提前预冷的 PBS，重悬细胞，并转移至 1.5ml 无菌离心管，4℃1000g离心3～5min，使细胞沉到管底。
③小心吸取上清并丢弃，可留大约 50μl PBS，以免吸走细胞，轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。
2. 配制 Cell Stain Buffer 工作液：
取适量 Cell Stain Buffer(2×)与无菌去离子水或蒸馏水等比例混合，即为 Cell Stain Buffer 工作液，4℃保存备用。
3. Hoechst 33342/PI 染色：
⑴一步法：取上述收集好的 0.1～1×106细胞，加入 0.9ml Cell Stain Buffer 工作液，重悬细胞沉淀。加入 5μl Hoechst 33342 Stain 和 5μl PI Stain，轻轻混匀，置于冰浴或4℃，孵育 20～30min。
⑵两步法：
①加入 5μl Hoechst 33342 Stain，置于 37℃水浴，孵育 5～15min。
②置于冰水中冷却后，4℃ 1000g 离心 3～5min，使细胞沉到管底，弃上层染色液。
③加入 0.9ml Cell Stain Buffer 工作液，重悬细胞沉淀。
④加入 5μl PI Stain， 置于冰浴或 4℃，孵育 20～30min。
4. 检测与分析：
用流式细胞仪在激发波长 400～500nm 检测蓝色荧光，在大于630nm处检测红色荧光，同时检测光散射情况，采用适当分析软件进行细胞 DNA 含量分析和光散射分析；如果使用荧光显微镜检测，检测前 4℃ 1000g 离心 3～5min 沉淀细胞，用PBS洗涤一次，再涂片观察红色荧光和蓝色荧光。对于贴壁细胞使用荧光显微镜检测，亦可不收集细胞，弃培养液后直接依次按照上述比例加入试剂(A)、试剂(B)、试剂(C)，冰浴或4℃染色20～30min，染色后 PBS 洗涤 1 次，再在荧光显微镜下观察。
染色结果
在蓝色荧光对红色荧光的散点图上，正常细胞呈低蓝光/低红光，凋亡细胞呈高蓝光/低红光，坏死细胞呈低蓝光/高红光。
注意事项1. 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽快检测。
2. 在为了获得细胞沉淀的离心的过程中，对于特殊细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当提高离心力或延长离心时间。
3. Heochst 33342 与细胞孵育的时间不宜过长，一般控制在 20min 以内，太长容易引起Heochst 33342 的发射光谱由蓝光向红光迁移，导致红色荧光与蓝色荧光的比例改变。
4. 如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测，则必须把组织消化后，制备成单细胞悬液，才可以进行检测
5. PI 对人体有一定刺激性，请注意适当防护。
6. 我司生产的生化试剂如无特殊标注，基本为非无菌包装，若用于细胞实验，请提前做好预处理。需低温保存的产品，一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
7. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
8. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
9. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
备注：由于产品信息可能会有优化升级，请以实际收货标签信息为准。
