- 细胞类
- 生化试剂
- ELISA检测
-
抗体蛋白
二抗生物素标记 过氧化物酶(HRP)标记 胶体金试剂 FITC荧光标记 RBITC荧光标记 二抗免疫血清 其它荧光标记二抗 藻红蛋白(PE)荧光标记 胶体金(Gold)标记 SAlexa Fluor荧光系列 碱性磷酸酶(AP)标记 别藻蓝蛋白(APC)荧光标记 其它标记 PE标记二抗 DyLight标记二抗 AU标记二抗 Biotin标记二抗 AMCA标记二抗 Texas Red标记二抗 TRITC标记二抗 HRP标记二抗 未标记二抗 Cy标记二抗 AbBox Fluor标记二抗内参抗体 小分子抗体抗体标记试剂盒细菌抗体蛋白病毒包装试剂杂交瘤融合筛选WB、IHC、ELISA相关试剂细胞培养试剂病原微生物抗原抗体假病毒抗体校准品其他抗原抗体标记的标签抗体病理级IHC抗体重组蛋白
- 细胞培养
- 实验耗材
- 仪器设备
- 生化试剂盒
- 小分子试剂
- 基质胶
-
斑马鱼产品
订货时间：周一至周五
订货Q Q：79688691
订货邮件：79688691@qq.com
基本信息-
产品名称乳酸脱氢酶(LDH)细胞增殖及毒性检测试剂盒
-
保存温度按试剂盒各组分温度保存
-
有效期1年
产品简介乳酸脱氢酶（LDH）存在于细胞内，正常情况下，不能透过细胞膜。当细胞受到损伤时，由于细胞膜通透性改变，LDH 可从细胞内释放至培养液中。释放出来的LDH在催化乳酸的过程中，使氧化型辅酶Ⅰ（NAD+）变成还原型辅酶（NADH），后者再通过递氢体—吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）还原碘硝基氯化氮唑蓝（INT）形成有色的甲基化合物，在490nm波长处有一吸收峰，因此可通过比色来定量乳酸脱氢酶的活性，也可利用读取的吸光度值，检测细胞坏死情况。
产品组成| 组分 | 100T | 500T | 保存温度 | |
| Lysis Buffer | 2ml | 10ml | 2-8℃ | |
| LDH matrix Solution | Solution Ⅰ | 2ml | 10ml | 2-8℃ |
| Solution Ⅱ | 2ml | 10ml | -20℃ 避光 | |
| Solution Ⅲ | 2ml | 10ml | ||
| Solution Ⅳ | 5ml | 25ml | ||
| Solution Ⅴ | 6ml | 30ml | 2-8℃ | |
| Stop Solution | 3ml | 15ml | 2-8℃ | |
操作步骤（仅供参考）1. LDH 底物液配置
使用前，将各个组分置于室温融化，按照比例 Solution I : Solution II : SolutionIII : SolutionIV：Solution Ⅴ=2:2:2:5:6 混合即得 LDH 底物液。最好现配现用。
2. 操作步骤
1）LDH 释放检测
a. 收集对数期细胞，根据细胞的大小和生长速度调整细胞悬液浓度，设置细胞梯度，分于96 孔板，每孔 100μL，置 37℃、5% CO2 培养箱培养使细胞贴壁，培养6-24 小时。
b. 吸去培养液，用 PBS 液洗涤一次。换 200μL 新鲜培养液(推荐使用含1%血清的低血清培养液或适当的无血清培养液)，每孔加 20μL 试剂盒提供的Lysis Buffer ，反复吹打数次混匀。
c. 继续在 37℃、5% CO2 细胞培养箱中孵育 30min。
d. 将细胞培养板用多孔板离心机 1500 rpm 离心 5min(没有多孔板离心机，可吸入离心管离心）。分别取各孔的上清液 120μL，加入到一新的 96 孔板相应孔中，然后每孔中加入100μLLDH底物液，混匀，室温避光静止 10-30 min，也可用铝箔包裹后置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动 10-30min。
e. 每孔加 30μL 终止液，测 490nm 处吸光度值。（以吸光度为 Y 轴，细胞浓度为 X 轴绘图。）
2）细胞毒性检测
a. 收集对数期细胞，根据细胞的大小和生长速度调整细胞悬液浓度，分于96孔板，每孔100μL，置 37℃、5% CO2 培养箱培养使细胞贴壁，培养 6-24 小时。
b. 加入不同药物进行处理，并设置适当对照。药物刺激完毕后，尽量吸除上清，换200μL新鲜培养液(推荐使用含 1%血清的低血清培养液或适当的无血清培养液)，每孔加20μL试剂盒提供的 Lysis Buffer，反复吹打数次混匀。
c. 继续在 37℃、5% CO2 细胞培养箱中孵育 30min。
d. 将细胞培养板用多孔板离心机 1500rpm 离心 5min(没有多孔板离心机，可吸入离心管离心）。分别取各孔的上清液 120μL，加入到一新的 96 孔板相应孔中，然后每孔中加入100μLLDH底物液，混匀，避光室温静止 10-30 min，也可用铝箔包裹后置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动 10-30 min。
e. 每孔加 30μL 终止液，测 490nm 处吸光度值。（可绘制细胞毒性曲线：纵坐标为实际吸光度，横坐标为药物浓度）
注意事项1. 每种细胞的 LDH 量不同，建议正式实验前选取几个样本做预实验，以优化实验条件，确定最佳的细胞用量，以取得最佳实验效果。2. 由于使用 96 孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发的问题。可以采取弃用周围一圈的办法，改加 PBS、水或培养液；也可以把96 孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。
3. 如果检测细胞培养液中的乳酸脱氢酶，由于血清含有乳酸脱氢酶，建议血清的使用浓度不要超过 1%，并最好使用热灭活血清。
4. 接种时注意细胞悬液一定要混匀，以避免细胞沉淀下来，导致每孔中的细胞数量不等，可以每接种几个孔就混匀一下。
5. 我司生产的生化试剂如无特殊标注，基本为非无菌包装，若用于细胞实验，请提前做好预处理。需低温保存的产品，一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
6. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
7. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
8. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
备注：由于产品信息可能会有优化升级，请以实际收货标签信息为准。
附图
相关产品
