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细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(中性红法)  Cite:5    分享

货号： C11206
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规格:
500T 1000T
单位:
盒
单价:￥480.00
基本信息
产品简介
产品组成
操作步骤（仅供参考）
注意事项
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基本信息
  • 产品名称
    细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(中性红法)
  • 保存温度
    2-8℃ 避光
  • 有效期
    1年
产品简介

细胞对中性红的摄入取决于活细胞细胞对 pH 梯度的维持能力。在生理pH 条件下，中性红染料的净电荷几乎为零，从而使其能通过非离子被动扩散的方式穿透细胞膜进入细胞。溶酶体(lysosomes)中的质子梯度使溶酶体中的 pH 值低于细胞质，从而可以使中性红带上电荷并在溶酶体中积累。在细胞增殖加快时，细胞数量增多，可以摄入的中性红的量就会增加。在细胞受到损伤时，中性红的摄入能力会下降。经过一定时间摄入后，细胞经清洗并用裂解液裂解即可释放中性红而用于检测。这样通过测定细胞对于中性红的摄入量，就可以确定细胞的增殖或毒性情况。细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒（中性红法）是一种基于细胞对于中性红的摄入能力来检测细胞增殖或细胞毒性的试剂盒。本产品优化了试剂组成，由原来的双组分改为三组分，产品性质更加稳定，不易产生沉淀析出现象，可重复性良好。

产品组成
组分500T1000T保存温度
 试剂(A)：中性红染色液A1：中性红储备液0.5ml1ml2-8℃ 避光
A2：中性红稀释液5ml10ml室温
  在孵育前，按照 1:10 比例混合 A1、A2 即为中性红染色液，建议现用现配，不宜提前配制
  试剂(B)：中性红裂解液50ml100ml2-8℃


操作步骤（仅供参考）

自备材料
酶标仪或微量分光光度计、1×PBS
操作步骤（仅供参考）
1. 把细胞培养在 96 孔培养板内，每孔加入 100ul 细胞培养液，设置适当的阴性对照和阳性对照，并给予药物刺激。（见注意事项 4）
2. 至待检测时间点，如果培养液中的药物推测不会对后续检测产生干扰，直接加入10ul 准备好的中性红染色液；如果培养液中的药物可能会对后续检测产生干扰，先用 1×PBS 洗涤1-2 次，随后加入100ul细胞培养液，并加入 10ul 中性红染色液，或直接将中性红染色液混入培养液后加入孔板。
3. 细胞培养箱内恒温孵育 2 小时。（见注意事项 2）
4. 去除含有中性红染色液的细胞培养液，用 1×PBS 洗涤 1-2 次。
5. 加入 100ul 中性红裂解液，室温裂解 10 分钟。在摇床上摇动可以促进样品的裂解萃取。
6. 在 540nm 测定裂解后液体吸光度值，可以选择 690nm 作为参考波长。
染色结果ed_1754914840109774.png
单种细胞的液泡系体积趋于一致，即在一定细胞数范围内，能够摄取的中性红的量与细胞数成线性相关。通过带入标曲可以对增殖和毒性损伤导致的细胞数量变化进行数字化统计。以A549 细胞为例，检测效果如右：


注意事项

1. 第一次使用本试剂盒时建议先取少量样品做好预实验。本产品实测数据会因细胞种类、细胞状态、检测仪器等的不同而存在差异。
2. 对于细胞密度非常低，细胞代谢速率非常慢的情况，可以把孵育时间延长到3-4 个小时。
3. 96 孔板在细胞培养过程中会存在蒸发问题，可以在外围一圈每孔加入 100ul PBS 防止蒸发，以免对后续中性红吸收和数据检测造成干扰。

4. 我司生产的生化试剂如无特殊标注，基本为非无菌包装，若用于细胞实验，请提前做好预处理。需低温保存的产品，一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。

5. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。 

6. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。 

7. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。 

 

备注：由于产品信息可能会有优化升级，请以实际收货标签信息为准。

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