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斑马鱼产品
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基本信息-
中文名称Fluo-4 AM 钙离子荧光探针(5mM)
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英文名称Fluo-4 AM
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保存温度-20℃ 避光
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有效期1年
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应用最常用的检测细胞内钙离子浓度的荧光探针之一
产品简介Fluo-4是一种将Fluo-3结构中的Cl替换成F的钙荧光探针。由于将Cl 替换成了电子吸引力更强的F，它的最大激发波长会向短波长处偏离10nm左右。这个波长更更接近于氩激光器的波长，所以用氩激光器激发时，Fluo-4的荧光强度比Fluo-3强一倍。Fluo-4 AM穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-4，从而被滞留在细胞内，Fluo-4若以游离配体形式存在时几乎是非荧光性的，但是当它与细胞内钙离子结合后可以产生较强的荧光，最大激发波长为494nm，最大发射波长为 516nm。可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度的变化。
本品Fluo-4 AM 钙离子荧光探针(5mM)是配制于无水DMSO (anhydrous DMSO)中的储存母液，浓度为5mM。
操作步骤（仅供参考）以Human T cells为例
一、5mM 的 Fluo-4, AM/DMSO
配置Pluronic F127母液：100mg Pluronic F127中加入0.5ml DMSO，配置成20%（w/v）的DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不要冷藏。如果有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。
Hanks•balanced salt solution(HBSS 不含钙镁)
HEPES buffer saline(10mM HEPES，1mM Na2HPO4，137mM NaCl，5mMKCl，1mMCaCl2，0.5mM MgCl2，5mM glucose，0.1% BSA，pH 7.4)
二、操作
1. 向 Fluo-4 AM/DMSO溶液中加入等体积的20%的Pluronic F127溶液，Pluronic F127可以防止Fluo-3 AM在 HBSS中聚合并能够帮助其进入细胞。注意：不建议在Pluronic F127中长期保存Fluo-4 AM溶液。
2. 用HBSS稀释Fluo-4 AM溶液，制备4µM的Fluo-4 AM工作液。
3. 将Fluo-4 AM 工作液加入细胞，在 37℃培养20分钟。
4. 加入5倍体积的含有1%胎牛血清的HBSS，再继续培养40分钟。
5. 用HEPES buffer saline 洗涤细胞3次，然后用HEPES buffer saline使细胞重悬浮，制成1×105 cells/mL的溶液。
6. 37℃下培养10分钟，然后用该细胞进行荧光钙离子检测。激发波长494nm，发射波长516nm。
*标记的条件因细胞种类而异，在每次实验前，请先确定最佳条件。以上方法仅供参考。
注意事项1. Fluo-4 AM遇水极易分解，建议第一次使用时，母液分装并密封保存，同时注意保持干燥。
2. Fluo-4 AM在4ºC、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以20-25ºC水浴温育片刻至全部融解后使用
3. 探针的工作浓度、细胞量、孵育温度和时间等需要根据不同实验预先摸索。
4. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
5. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
6. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
7. 实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
备注：由于产品信息可能会有优化升级，请以实际收货标签信息为准。
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